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豬偽狂犬病 研制成功區(qū)分強(qiáng)弱毒感染的鑒別診斷方法：gG-EKISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))和gE-ELISA，gG-LAT(乳膠凝集試驗(yàn))和gE-LAT。擬訂出了我國(guó)豬偽狂犬病的根除計(jì)劃，根據(jù)不同豬場(chǎng)、不同情況和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)情況，選擇不同的方案與措施。
豬繁殖與呼吸綜合癥：應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)，以融合蛋白的形式高效表達(dá)了PRRSV的核衣殼蛋白(N蛋白)，其含量達(dá)到了菌體蛋白含量的32％，該表達(dá)產(chǎn)物能與抗N蛋白的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)�；钚詸z測(cè)試驗(yàn)表明，該蛋白不僅能與PRRSV的多克隆抗血清發(fā)生反應(yīng)，而且反應(yīng)敏感，非特異性背景較低，與以全病毒為包被抗原進(jìn)行的ELISA檢測(cè)結(jié)果相吻合。這為今后以此表達(dá)產(chǎn)物為抗原，建立反應(yīng)敏感、特異、準(zhǔn)確的PBRSV的檢測(cè)方法，從而替代用制備過(guò)程比較復(fù)雜的全病毒為抗原進(jìn)行ELISA檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。研究表明，PRBSVORF5編碼的GP5(E)蛋白能在豬體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，且起主要作用的表位是構(gòu)象型中和表位，與GP5蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。PRRSV中國(guó)分離株B13株的ORF基因被正確插入到桿狀病毒的基因組DNA中，構(gòu)建出了重組病毒AcMNPV-OCC-ORF5，用該重組病毒感染Sf9細(xì)胞，獲得了能夠被豬抗PRRSV B13株血清特異識(shí)別的表達(dá)產(chǎn)物。ORF5基因表達(dá)產(chǎn)物與天然蛋白分子量十分接近，說(shuō)明桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)能較適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行合成蛋白的加工和修飾，為PRRS基因工程疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。建立了診斷豬繁殖與呼吸綜合癥與日本乙型腦炎的二聯(lián)PCR方法。建立了微量免疫滴定技術(shù)測(cè)定PRRSV TCID50的新方法――免疫染色法。應(yīng)用蝕斑克隆技術(shù)對(duì)一株美洲株疫苗弱毒株進(jìn)行了篩選，選育出高增殖力的、安全高價(jià)的弱毒株。
豬圓環(huán)病毒感染：分離鑒定了國(guó)內(nèi)PCV毒株。通過(guò)DNA序列分析證實(shí)，圓環(huán)病毒(PCV)中國(guó)分離株與國(guó)外分離株同源性不是特別高，推測(cè)病毒已發(fā)生變異。建立并初步應(yīng)用了檢測(cè)PCV的復(fù)合PCR方法。
豬細(xì)小病毒病：國(guó)內(nèi)已經(jīng)開(kāi)始了豬細(xì)小病毒病基因工程亞單位疫苗以及核酸疫苗的研究。試驗(yàn)表明，以PPV結(jié)構(gòu)基因VPI和VP2分別構(gòu)建的核酸疫苗，均能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高水平的體液免疫和細(xì)胞免疫。核酸疫苗的生產(chǎn)簡(jiǎn)便，成本低廉，有著理想的應(yīng)用前景。對(duì)PPV SY-99株非結(jié)構(gòu)蛋白NS1基因進(jìn)行了克隆與原核表達(dá)，其意義在于檢測(cè)NSI的抗體可以用來(lái)區(qū)別滅活疫苗免疫豬和自然感染豬。
豬乙型腦炎：應(yīng)用pET-30b（＋）表達(dá)載體表達(dá)的NS1蛋白具有較好的免疫學(xué)活性，可作為一種候選亞單位疫苗。
豬鏈球菌�。呵v膜2型豬鏈球菌已成為一種重要的新病原菌，致病差異與各菌株的毒力因子是直接相關(guān)的。已知的毒力因子有溶菌酶釋放因子(MRP)、細(xì)胞外蛋白因子（EF）、溶血素、莢膜多糖以及44K蛋白、IgG結(jié)合蛋白、纖毛、粘著素等。其中溶菌酶釋放蛋白（MRP）與細(xì)胞外蛋白因子（EF）是豬鏈球菌2型的兩種最重要的毒力因子。基因序列同源性分析結(jié)果顯示：我國(guó)豬鏈球菌2型江蘇分離株SS2-1毒力因子MRP與EF基因序列與國(guó)外分離株的兩毒力因子的序列高度一致。這一結(jié)果表明豬鏈球菌2型菌株的毒力因子MRP與EF的基因序列極為保守，從而為2型鏈球菌毒力因子MRP與EF的基因檢測(cè)與鑒定以及豬鏈球菌2型菌的免疫研究提供了依據(jù)。建立了PCB檢測(cè)方法，有利于疾病發(fā)生時(shí)的快速診斷和流行病學(xué)的調(diào)查。建立了檢測(cè)MRP的PCR方法，全程只需7小時(shí)左右，且最低只需100個(gè)細(xì)菌即能檢出，敏感性和特異性很高。在對(duì)臨床分離的致病性豬鏈球菌進(jìn)行分群鑒定的基礎(chǔ)上，通過(guò)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（PAPD）技術(shù)對(duì)其分型，確定了不同菌株間的遺傳距離，挑選出有代表性的菌株制成多價(jià)滅活疫苗，用于豬鏈球菌病的免疫防治。建立了鏈球菌特異性間接血凝（I-HA）試驗(yàn)方法，為鏈球菌的分群鑒定、血清學(xué)調(diào)查、多價(jià)疫苗菌種的選擇以及疫苗應(yīng)用效果的監(jiān)測(cè)提供了新的檢測(cè)手段。鏈球菌病多價(jià)滅活疫苗首次在國(guó)內(nèi)明確采用C、D兩強(qiáng)毒菌株作為制苗材料，由于C、D群是國(guó)內(nèi)腦炎型和敗血型鏈球菌病的主要病原，所以這種疫苗具有廣泛的適用性，克服了各地現(xiàn)行的弱毒或滅活的單價(jià)苗抗原的片面性和局限性。系統(tǒng)、全面地提出了本病診斷、致病菌的分離和分群鑒定以及疫苗的免疫程序、藥物防治、消毒及管理諸方面一整套綜合措施。
豬接觸傳染性胸膜肺炎：對(duì)胸膜肺炎放線桿菌(APP)主要致病因子的致病性及其免疫原性的研究結(jié)果表明，這些毒力因子包括莢膜多糖(CP)、脂多糖（LPS）、外膜蛋白(OMP)、細(xì)胞毒素(Apx)、轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白(TBP)、蛋白酶、滲透因子、菌毛等，并且認(rèn)為任何一種毒力因子均不能提供完全有效的免疫保護(hù)。其中Apx是本菌最重要的毒力因子�，F(xiàn)已證明不同血清型的菌株可產(chǎn)生3種Apx，它們具有溶細(xì)胞作用，屬于含重復(fù)子毒素(repeats-intoxin,RTX)家族。APP有很多血清型，其劃分依據(jù)是基于細(xì)菌CP及LPS對(duì)血清的反應(yīng)。迄今為止已鑒定出兩個(gè)生物型和12個(gè)血清型，其中血清5型又分為A、B兩個(gè)亞型。建立了用于APP定性的ELISA抗體檢測(cè)方法，已編入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。華中農(nóng)大建立了檢測(cè)豬胸膜肺炎放線桿菌的PCR方法。
豬氣喘病(豬支原體肺炎，MPS)：在國(guó)內(nèi)首次提出了“規(guī)模化種豬場(chǎng)豬氣喘病的防治與凈化措施”方案。該病的發(fā)病特點(diǎn)為：(1)品種敏感性強(qiáng)。（2）豬場(chǎng)隱性感染和潛伏性感染豬為主要危害，尤以初產(chǎn)母豬為甚。（3）高感染率種豬場(chǎng)仍以藥物防治為主，配合免疫和生物安全措施，需根據(jù)豬場(chǎng)用藥歷史、種豬結(jié)構(gòu)確定適當(dāng)?shù)乃幬�，適當(dāng)?shù)挠盟幊绦虮人幬锉旧砀匾＃?）MPS常與多種細(xì)菌、病毒及環(huán)境因素協(xié)同作用，引起豬呼吸道綜合癥（PRDC），多因子包括豬瘟（HC）、豬流感（SI）、偽狂犬病(PR)、豬繁殖與呼吸道綜合癥（PRRS）、克雷伯氏桿菌、副嗜血桿菌（HPS）、豬圓環(huán)病毒（PCV）感染與斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合癥（PMWS）、豬胸膜肺炎放線桿菌感染(APP)、豬多殺性巴氏桿菌感染（Pmt），萎縮性鼻炎(AR)、豬霍亂沙門(mén)氏菌病等。PRDC臨床表現(xiàn)為嗜眠、厭食、發(fā)燒、咳嗽。在18周齡-20周齡發(fā)展到嚴(yán)重程度，臨床表現(xiàn)明顯，俗稱“呼吸道病18周齡墻”，PCV引起的PMWS和間質(zhì)性壞死性肺炎(PNDS)是另一個(gè)重要的協(xié)同因子。在規(guī)�；i場(chǎng)，PRDC特別是其中的PRRS、PCV感染和鏈球菌感染為呼吸道病防治提出了新課題。目前常用于治療該病的藥物有鹽酸土霉素、泰樂(lè)菌素、泰妙菌素、林可霉素、克林霉素、喹諾酮類藥物。種豬場(chǎng)為防范MPS發(fā)生，一般采取飼料或飲水中全群投藥，藥物投放的時(shí)間、種類、劑量、療程應(yīng)根據(jù)豬群狀況確定不同的投藥策略。MPS免疫機(jī)理決定了MPS產(chǎn)生免疫的能力相對(duì)較弱，以產(chǎn)生體液免疫為主的滅活疫苗免疫能力更弱。
MPS的免疫要點(diǎn)為：(1)總體上，弱毒苗、滅活苗免疫力有限，免疫時(shí)控制同圈感染至關(guān)重要。（2）多胎母豬或種公豬可以通過(guò)藥物使其成為具有抗感染能力的康復(fù)豬，或用滅活苗提高其免疫力，以降低帶菌率，生物安全體系與飼養(yǎng)管理要相結(jié)合。地方品種豬陽(yáng)性場(chǎng)或MPS較高感染率豬場(chǎng)凈化方案：須首先對(duì)母豬、仔豬進(jìn)行程序性用藥，仔豬5日齡-7日齡用疫苗免疫，可逐步建成一個(gè)免疫場(chǎng)。針對(duì)豬場(chǎng)生產(chǎn)狀態(tài)，在不影響生產(chǎn)的情況下，采取嚴(yán)格淘汰病豬、藥物治療及疫苗預(yù)防、強(qiáng)化飼養(yǎng)管理為主的綜合防治措施，使豬氣喘病發(fā)病率降低至5％以下，即基本達(dá)到控制標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)外引進(jìn)豬原種豬場(chǎng)或MPS低感染率自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)凈化方案：由國(guó)外引進(jìn)的純種杜、長(zhǎng)、大及PIC、達(dá)蘭、斯格、迪卡配套系，由于核心場(chǎng)多采用SPF技術(shù)，MFS一般很少存在，嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)和21天斷奶可有效防止MPS的發(fā)生，但引進(jìn)豬場(chǎng)與有MPS的其它豬混群，則須進(jìn)行疫苗防疫，并適當(dāng)配合用藥，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和提高生物安全標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)對(duì)APP、AR、PR、鏈球菌病等綜合控制。有條件的可采用剖腹產(chǎn)建立無(wú)特定病原(SPF)豬核心群，積極推廣加藥早期斷奶和早期隔離斷奶技術(shù)。另外采用保健養(yǎng)豬的方法提高飼料蛋白的利用率，改善飼舍環(huán)境，提高動(dòng)物自身免疫力，也是減少或避免此病的另一重要方法。
豬附紅細(xì)胞體�。耗壳暗脑\斷主要還只是在血片中查找蟲(chóng)體，CFT只適于群體檢查，不適于個(gè)體檢查，且敏感性低。EUSA的敏感性明顯高于CFT，且能證明E．suis抗原與豬的其它疾病的血清無(wú)交叉反應(yīng)，是一種敏感、快速、特異的診斷方法，但此法不適用于E.suis的診斷。蟲(chóng)血癥期間，感染豬血液中含有大量E．suis，故可以從血液中抽提DNA，以32P標(biāo)記制成探針，能區(qū)別感染豬和非感染豬，并且不與其它疾病血清中的DNA發(fā)生雜交反應(yīng)。后來(lái)又用PCR技術(shù)檢查豬附紅體感染，證明感染后24小時(shí)即可出現(xiàn)PCR陽(yáng)性。PCR-DNA雜交技術(shù)經(jīng)常規(guī)檢測(cè)方法更簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、敏感特異、快速，易于操作，有助于常規(guī)分析，但抗體水平具有一定的波動(dòng)性，陽(yáng)性結(jié)果僅僅在個(gè)體檢測(cè)中有意義。故應(yīng)進(jìn)一步改進(jìn)以適用于群體檢測(cè)。藥物治療方面，目前用于治療該病的藥物雖有多種，但缺乏特效藥物。值得注意的是，大量實(shí)驗(yàn)證明suis為條件致病性病原體，其感染和發(fā)病主要與機(jī)體免疫狀況有關(guān)。當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全(或免疫系統(tǒng)受到抑制)或抵抗力下降或處于某些應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，附紅體感染率和發(fā)病率上升。
