《養(yǎng)豬小課堂》豬場進行非瘟檢測時，確診的判斷依據(jù)是什么？

參考答案：核酸檢測結(jié)果

核酸檢測的物質(zhì)是病毒的核酸。核酸檢測是查找動物淋巴結(jié)、血液或脾臟等組織器官是否存在外來入侵的病毒的核酸，來確定是否被病毒感染（人的新冠病毒檢測和豬的非瘟病毒檢測原理是一致的）。因此一旦檢測為核酸“陽性”，即可證明動物體內(nèi)有病毒存在。所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，非瘟病毒是一種雙鏈DNA病毒。

檢測非瘟病毒和新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR（qPCR）。在PCR反應(yīng)體系中，熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測出熒光到達預先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值）與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高， Ct值越小。樣本來源包括：

樣本采集時應(yīng)注意穿戴個人生物安全防護裝備，實施現(xiàn)場消毒和廢棄物處理。

1）活豬：血液，扁桃體液等液體樣品。

2）病死豬：脾、肺、腎、淋巴結(jié)、肌肉等組織樣品。

3）周邊環(huán)境：飼料、車輛、糞便、污水、欄舍等均周邊環(huán)境樣品。

病毒核酸提取

病毒核酸提取前，一般血液、扁桃體液等液體樣品不需處理，直接用病毒核酸提取試劑盒提取樣品gDNA，對于耐抑制性能較強的qPCR試劑，也可以直接取液體樣品進行下游qPCR實驗。但組織樣品在進行病毒核酸提取前，需要進行研磨裂解處理。

qPCR檢測

qPCR檢測步驟包括配制qPCR反應(yīng)體系和加樣上機檢測。每次檢測試驗都需要設(shè)立陽性對照和陰性對照組。具體操作可參照所用qPCR試劑盒說明書。

結(jié)果分析(不同企業(yè)的產(chǎn)品會依據(jù)自身產(chǎn)品的性能確定本產(chǎn)品的陽性判斷值)

1、質(zhì)控標準

1）陰性對照的Ct值應(yīng)＞38或無Ct值。

2）陽性對照的Ct值應(yīng)≤35，并出現(xiàn)典型的擴增曲線。

3）若陰性和陽性對照不滿足以上條件，此次實驗視為無效。

2、樣品結(jié)果判定

1）陰性：檢測樣品的Ct值＞38或無Ct值，表明樣品為陰性。

2）陽性：檢測樣品的Ct值≤35，且出現(xiàn)典型的擴增曲線，表示樣品為陽性。

3）可疑：檢測樣品的35＜Ct值≤38，且出現(xiàn)典型的擴增曲線，應(yīng)重檢，重檢仍出現(xiàn)上述結(jié)果的判為陽性，否則判為陰性。

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