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豬精液采集后，首先要評(píng)定公豬精液質(zhì)量，然后才能對(duì)精液進(jìn)行進(jìn)一步處理，以獲取高質(zhì)量的精液。處理精液以前，選擇能有效篩選精液的方法對(duì)提高豬場(chǎng)的繁殖性能是必要的。在最理想的情況下，在精液處理前對(duì)公豬的精液進(jìn)行全面地評(píng)估，以鑒別出那些劣質(zhì)精液。對(duì)儲(chǔ)藏的精液，每天必須檢查總活動(dòng)精子數(shù)和評(píng)估精子的外形;這樣，將可以確保用于人工授精的精液不被污染。因此，這篇文章的目的就是敘述公豬精液質(zhì)量的評(píng)定方法和說(shuō)明哪些公豬的精液可以進(jìn)入試驗(yàn)室進(jìn)行進(jìn)一步處理。
2、密度
一般在評(píng)定公豬精液的質(zhì)量時(shí)應(yīng)檢測(cè)四個(gè)基本參數(shù)：精子密度、活力、外形和頂體完整性。其中，精子的密度和活力這兩個(gè)基本參數(shù)常在精液處理前篩選精液。原因是測(cè)定這兩個(gè)參數(shù)花費(fèi)的時(shí)間最少，而且可以用它們來(lái)計(jì)算精液的稀釋倍數(shù)。
測(cè)定精液的濃度或精子的總數(shù)不僅是評(píng)定精液質(zhì)量的組成部分，更重要的是用來(lái)監(jiān)控公豬健康狀況和繁殖潛力;并且，它還是優(yōu)化個(gè)體遺傳潛力的主要考慮因素。正確的評(píng)定精液的質(zhì)量不只是增加公豬每次射精量和提高公豬舍的使用效率的唯一因素。精液質(zhì)量評(píng)定的目的是保證有足夠數(shù)量有活力的精子用于人工授精。
3、精子的活力
精液的活力是精液評(píng)定的一個(gè)重要方面。最近的一個(gè)研究表明：當(dāng)在采精后立即（少于24h）進(jìn)行評(píng)定和輸精時(shí)，使用精子活力低于62.5%，產(chǎn)仔數(shù)/產(chǎn)仔率將下降。然而，由于商用種公豬的精液很少會(huì)在這么短時(shí)間內(nèi)使用，所以，一般精液都經(jīng)過(guò)處理后才輸送到母豬場(chǎng)使用。精液經(jīng)過(guò)儲(chǔ)存后，它的活力會(huì)下降。所以在評(píng)定種公豬精液時(shí)，活力最小值應(yīng)大于60%。許多種公豬站制定了精子活力在70~80%之間的篩選標(biāo)準(zhǔn)。精液經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室處理后活力最小值應(yīng)根據(jù)使用前計(jì)劃儲(chǔ)存時(shí)間和在這段儲(chǔ)存時(shí)間內(nèi)的預(yù)期活力下降而定。并且，種公豬站必須考慮養(yǎng)豬場(chǎng)精液儲(chǔ)存條件和處理精液的能力比公豬站差這一點(diǎn)�？紤]公豬站與母豬場(chǎng)之間精液輸送的差異將有助于公豬站選擇初活力的接受水平以確保輸送精液的精子活力在60.0%以上。
通過(guò)顯微鏡從視覺(jué)上估計(jì)精子活力的方法應(yīng)用最廣泛。技能和經(jīng)驗(yàn)對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性有一定的影響。簡(jiǎn)而言之，在溫?zé)岬妮d玻片上放置一小滴精液稀釋液（所有的評(píng)估中精液的稀釋率必須統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)），然后蓋上蓋玻片。樣本稀釋到用400倍的物鏡足以觀察全部精子細(xì)胞，總體的估計(jì)來(lái)自觀察的精子群。這樣，應(yīng)首先對(duì)實(shí)驗(yàn)員進(jìn)行培訓(xùn)。這種培訓(xùn)首先要求實(shí)驗(yàn)員對(duì)總體精子活力進(jìn)行估計(jì)，然后實(shí)驗(yàn)員用顯微鏡計(jì)算在5個(gè)區(qū)域內(nèi)10個(gè)單元格的精子總數(shù)和有活力的精子占總精子的百分?jǐn)?shù)，以驗(yàn)證精子總活力。
4、外形
精子的外形和頂體完整同樣對(duì)精子的生存力有影響。就估計(jì)精液質(zhì)量而言，評(píng)定精子外形比評(píng)定精子活力更能體現(xiàn)精液質(zhì)量。這兩個(gè)參數(shù)和精子活力在精液質(zhì)量評(píng)定時(shí)都至關(guān)重要。它們一起決定精液的取舍。
運(yùn)動(dòng)的精子可能外形上不正常;但是，運(yùn)動(dòng)力低的精子可能受精。然而，沒(méi)有頂體的精子不可能受精。用這三個(gè)參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定精液質(zhì)量就很可能低估了精液真正的受精能力和公豬精液質(zhì)量。
正如精子的活力，精子的外形評(píng)定表明：在使用人工授精時(shí)，需要一個(gè)確定正常精子外形百分?jǐn)?shù)提高母豬繁殖率。研究資料還表明：精子常規(guī)評(píng)定使用的是外形這個(gè)參數(shù)。如果是使用精液，那么正常形態(tài)精子百分?jǐn)?shù)小于70%的精液應(yīng)認(rèn)為是劣質(zhì)精液。由于正常形態(tài)精子百分?jǐn)?shù)在儲(chǔ)存期將減少，而且由于在公豬個(gè)體間差異較大。所以，當(dāng)使用長(zhǎng)期（>24h）儲(chǔ)存的精液時(shí);最初處理的精液的正常形態(tài)的精子百分?jǐn)?shù)要達(dá)在70%以上。
在檢查精子活力同時(shí)可以粗略地對(duì)精子外形進(jìn)行評(píng)定。然而，理想的外形檢測(cè)要使用顯微鏡，它能區(qū)分精子的各個(gè)部分。精確地評(píng)定精子的外形是通過(guò)分別計(jì)算正常精子頭部、微滴和尾部數(shù)。吸取1-2滴精液按1：10與稀釋劑混合，使用顯微鏡(400倍或1000倍)觀察，外形百分?jǐn)?shù)可以直接計(jì)算出來(lái)。如果精液不可能立即被檢測(cè)(<30分鐘)，應(yīng)先用0.5-1mL生理鹽水固定或保存在載玻片上。除了保存樣品，精子同時(shí)被固定。因此，更容易觀察。可以觀察濕的樣本或者制成干的固定的標(biāo)本再進(jìn)行觀察。頭部、尾部和胞質(zhì)畸形的精子計(jì)為不正常的精子。盡管有近端小滴(靠近頭部)的精子對(duì)精液質(zhì)量評(píng)定的影響較小。然而，當(dāng)近端小滴迅速增加時(shí)，用產(chǎn)仔率和產(chǎn)仔數(shù)來(lái)衡量的繁殖力將逐漸降低。在采集的精液中末端微滴比近端小滴更易被發(fā)現(xiàn)，末端小滴的影響似乎與近端小滴一樣。盡管一些資料認(rèn)為公豬精液細(xì)胞質(zhì)微滴的影響是有限的。
5、頂體完整性
頂體膜覆蓋精子頭部的三分之二，它含有穿透卵母細(xì)胞所必需的酶。頂體完整性的評(píng)定很費(fèi)時(shí),需要比較先進(jìn)的顯微鏡，并且要有熟練地操作技能。一些研究表明：頂體完整性比精子的活力在評(píng)定精子質(zhì)量方面更具有代表性。頂體完整性檢查與精子外形檢查的方法一樣。然而，在檢測(cè)單個(gè)精子細(xì)胞時(shí)應(yīng)該先把載玻片放在顯微鏡下，然后觀察精子頂體層的差別。頂體完整率小于51%的精液認(rèn)定為劣質(zhì)的精液，即使精液的受精率可能是處于同一水平。頂體的完整性評(píng)定使用與活力和形態(tài)學(xué)評(píng)定一樣的原理。當(dāng)精液被長(zhǎng)期保存時(shí)，正常頂體百分?jǐn)?shù)小于51%精液的受胎率可能很低�；盍Γ庑�，或頂體完整性的評(píng)定并不能完全估計(jì)繁殖力，但是它卻是精子生存能力的基本表現(xiàn)。與公豬的射精能力預(yù)測(cè)產(chǎn)仔數(shù)和受胎率相比，以上所述的估計(jì)方法是通過(guò)消滅劣質(zhì)的精液來(lái)影響受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。
1）在外觀評(píng)定中使用染色劑
粗略地外觀評(píng)定單個(gè)公豬精液是必需的；然而，定期詳細(xì)地檢測(cè)可能提供了一種有效質(zhì)量監(jiān)控方法，以確保精液粗略地評(píng)定是否與精液真實(shí)外觀質(zhì)量相符。詳細(xì)地外觀評(píng)定要使用顯微鏡，有時(shí)需要使用染色劑對(duì)精子細(xì)胞進(jìn)行染色。與總外形檢測(cè)相比，它在高倍鏡頭（1000x：油浸）下對(duì)單個(gè)精子細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。詳細(xì)地外形檢測(cè)時(shí)，頭部、中部和尾部應(yīng)分開(kāi)計(jì)算。首先曙紅染色劑(商用外形染色劑)與精液按1：1混合制成載玻片涂片。這樣就能充分區(qū)分精子頭部形態(tài)的微小差別。通常是計(jì)算100個(gè)總精子細(xì)胞，然后計(jì)算出正常精子細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)，其它在外觀檢查使用的染色劑有：精子頭部染色威廉士染色劑、頂體染色的萘酚黃和紅霉素染色劑。
2）外觀，顏色和氣味
盡管顯微鏡評(píng)定是取、舍公豬精液的標(biāo)準(zhǔn);但是，明顯的視覺(jué)和嗅覺(jué)特性是精液品質(zhì)的象征。正常公豬精液必須具有可觀的體積（>150毫升），并且是乳白色的就像脫脂乳。精液中偶而帶少量的血，這些血通常是來(lái)自尿道，使精液略帶黃色。
采集到的精液決不能有明顯的異味,如果有，很可能是精液采集過(guò)程中衛(wèi)生環(huán)境差;也可能是精液采集過(guò)程存在不規(guī)則地波爾人衛(wèi)生流程。散發(fā)的氣味很可能就是包皮分泌液的反映(尿)，包皮分泌液通常滿(mǎn)載大量的細(xì)菌和外來(lái)的污染物。在精液稀釋液中使用抗生素可以在精液貯存期間控制病原體的生長(zhǎng)，并不能大大地減少和防止采精時(shí)的細(xì)菌污染。所以，必須檢查精液有無(wú)異味，并且一旦發(fā)現(xiàn)精液有異味就應(yīng)廢棄。此外、在大多數(shù)的公豬場(chǎng)應(yīng)有例行的周期性輸精培訓(xùn)。細(xì)菌能夠在較差的環(huán)境條件下大量繁殖，并且能在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。雖然用于輸精的精液幾乎不可避免會(huì)帶有細(xì)菌;但是，還極少有關(guān)于細(xì)菌形狀、含量與繁殖力之間關(guān)系的報(bào)道。然而，由于細(xì)菌污染與精液的保存時(shí)間減少、精液凝集以及子宮傳染性有關(guān)。所以，應(yīng)定期地檢驗(yàn)精液中的細(xì)菌污染，鑒定污染源以減少精液的污染。表2.列舉在公豬精液中發(fā)現(xiàn)一些較常見(jiàn)的細(xì)菌以及可能的起源。
3）溫度刺激和凝集
精液在收集后并不是直接輸送到實(shí)驗(yàn)室（即在畜舍和實(shí)驗(yàn)室或儲(chǔ)存庫(kù)之間輸送），考慮溫度波動(dòng)對(duì)精子的影響這一點(diǎn)是非常重要的�？焖俚亟禍貢�(huì)導(dǎo)致精子的冷休克。當(dāng)在顯微鏡下觀察，這種現(xiàn)象很明顯；有些精子尾部纏繞著頭部卷曲或緊緊地盤(pán)旋在精子頭部之下。通過(guò)顯微鏡觀察，一般的精子可以正常地存在于精液中；然而，當(dāng)溫度小于32℃時(shí)超過(guò)10%尾部卷曲的精子明顯顯示出冷休克現(xiàn)象。但是，我們不應(yīng)丟棄這些精液，應(yīng)該考慮用稀釋劑直接的稀釋?zhuān)ㄔ蚴窃谕瑯拥臏囟纫苑乐垢M(jìn)一步損害）。
很多資料表明精液凝集對(duì)繁殖力有一定的影響。原因是凝塊中的精子細(xì)胞是不能動(dòng)的。也許是由于精子細(xì)胞在穿過(guò)睪丸時(shí)已損害或者伴隨射精而損傷。精液凝集的其它原因可能包括在運(yùn)輸時(shí)溫度變化范圍過(guò)大和細(xì)菌污染。
當(dāng)計(jì)算精子密度時(shí)，考慮實(shí)際凝集度相當(dāng)重要，即使極少有精液凝塊影響繁殖力的報(bào)道。然而，當(dāng)用分光光度計(jì)檢測(cè)稀釋精液或用血球計(jì)計(jì)算精子時(shí)，可能會(huì)低估有活力的精子數(shù)。在顯微鏡下觀察，有時(shí)可以看見(jiàn)精子在凝塊內(nèi)部運(yùn)動(dòng);然而，沒(méi)有充分的證據(jù)證明這些精子細(xì)胞在受精后會(huì)分開(kāi)。所以，不管凝塊外觀上的運(yùn)動(dòng)性如何，都應(yīng)根據(jù)出現(xiàn)精液凝塊的百分?jǐn)?shù)以校準(zhǔn)計(jì)算整個(gè)精子數(shù)。精液中的凝塊可能與公豬、公豬與精液稀釋劑相互作用以及精液管理有關(guān)。
6、小結(jié)
精液質(zhì)量參數(shù)的正常值和最小值。最重要的是記住那些難以精確地檢測(cè)的外形上的和難以接近絕對(duì)值度量的頂體參數(shù)值。精子傾向性和樣本標(biāo)本滑動(dòng)可能會(huì)明顯地影響精子的計(jì)數(shù)。比如，只有當(dāng)精子平放在顯微鏡載玻片上時(shí)，頂體才能被看見(jiàn)。我們提供一種與其它的評(píng)估公豬精液潛在的授精能力同樣好的方法。符合公豬精液品質(zhì)評(píng)定中的一個(gè)或一個(gè)以上質(zhì)量參數(shù)的精液不能完全地確保是優(yōu)質(zhì)的精液。由于在母豬場(chǎng)輸送劣質(zhì)精液引起繁殖性能降低最終歸結(jié)于精液的來(lái)源。
