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江西河保畜牧_生產(chǎn)技術(shù)部經(jīng)理.何理想
人工授精站實驗室是精液檢查、處理、貯存的場所，為了生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的、符合輸精要求的精液，一定把好質(zhì)量關(guān)，保證出站的每一瓶精液的活力不低于0.7，72小時之內(nèi)保存活率不受影響,特對實驗室日常運作做如下規(guī)定。
1、實驗室要求整潔、干凈、衛(wèi)生，每周徹底清潔一次；
2、非實驗室工作人員在正常情況下不準進入實驗室，采精員也不準進入實驗室；
3、所有儀器設(shè)備應(yīng)在仔細閱讀說明書后，由專人按操作規(guī)程使用和維護保養(yǎng)；特別是高壓蒸氣滅菌器，超聲波洗凈器，雙蒸水器使用時更應(yīng)注意人身安全；
4、各種電器設(shè)備應(yīng)按其要求選擇適應(yīng)插座，除冰箱、精液保存箱、恒溫培養(yǎng)箱等外，一般電器要求人走斷電，干燥箱無人時設(shè)定溫度不應(yīng)高于100℃；
5、物品、器皿的清洗、消毒方法：所有器皿應(yīng)以洗潔精或洗衣粉清洗干凈，再以蒸餾水漂洗，60℃干燥（玻璃用品干燥溫度可高于100℃）后，以錫紙包扎器皿開口，玻璃器皿180℃ 1小時進行干熱滅菌，非耐熱器皿、用具以高壓滅菌器121℃、20分鐘濕熱滅菌；
6、稀釋液的配制、精液檢查、稀釋、分裝一定按照人工授精操作規(guī)程進行；
7、實驗室儀器設(shè)備保持清潔衛(wèi)生：實驗室內(nèi)使用的儀器設(shè)備，如顯微鏡、干燥箱、水浴鍋、17℃精液保存箱、冰箱、37℃恒溫板、電子天平等，必然保持清潔衛(wèi)生，顯微鏡鏡頭（目鏡和物鏡），應(yīng)每２周用二甲苯浸泡一次，保持清潔；
8、采精室與實驗室之間的傳遞口的兩測窗只有在傳遞物品時才能按先后順序開啟使用；
9、實驗室地板、實驗臺保持干凈清潔；
10、下班離開實驗室前一定檢查電源、水龍頭、門、窗是否關(guān)閉好，做到萬無一失方可離開實驗室，確保安全；
11、防火防盜，注意安全。
采精的操作規(guī)程
1、采精員一手帶雙層手套，另一手持37℃保溫杯(內(nèi)裝1次性食品袋)用于收集精液；
2、飼養(yǎng)員將待采精的公豬趕至采精欄，用0.1%高錳酸鉀溶液清洗其腹部和包皮，再用溫水（夏天用自來水）清洗干凈，避免藥物殘留對精子的傷害；
3、采精員擠出公豬包皮積尿，按摩公豬包皮部，刺激其爬跨假臺畜；
4、公豬爬跨假臺畜并逐步伸出yin莖，脫去外層手套，將公豬yin莖龜頭導(dǎo)入空拳；
5、用手（大拇指與龜頭相反方向）緊握伸出的公豬yin莖螺旋狀龜頭，順其向前沖力將yin莖的“s’’狀彎曲拉直，握緊yin莖龜頭防止其旋轉(zhuǎn)，公豬即可射精；
6、用四層沙布過濾收集濃份精液于保溫杯內(nèi)的一次性食品袋內(nèi)，最初射出的少量精液含精子很少，可以不必接取，有些公豬分2-3個階段將濃份精液射出，直到公豬射精完畢，射精過程歷時5-7分鐘；
7、采精員應(yīng)注意安全，一旦公豬出現(xiàn)攻擊行為，采精員應(yīng)立刻逃至安全角；
8、下班之前徹底清洗采精欄；
9、采精期間不準歐打公豬，防止出現(xiàn)性抑制；
10、采精頻率：成年公豬每周2次，青年公豬（1歲左右）每周1次。最好固定每頭公豬的采精頻率；
11、公豬采精調(diào)教：①后備公豬7月齡開始進行采精調(diào)教；②每次調(diào)教時間不超過15分鐘；③一旦采精獲得成功，分別在第2、3天再采精1次，進行鞏固掌握該技術(shù)；④采精調(diào)教可采用發(fā)情母豬誘導(dǎo)、觀摩有經(jīng)驗公豬采精、以發(fā)情母豬分泌物刺激等方法；⑤調(diào)教公豬要有耐心，不準打罵公豬；⑥注意公豬和調(diào)教人員的安全。
稀釋液配制操作規(guī)程
1、配制稀釋液的藥品要求選用分析純試劑，對含有結(jié)晶水的試劑要按摩爾濃度進行換算（如含水葡萄糖和無水葡萄糖）；
2、按稀釋液配方，用稱量紙、電子天平準確稱量藥品；
3、按1000ml、2000ml劑量稱量稀釋粉，置于密封袋中；
4、使用前將稱量好的稀釋粉溶于定量的雙蒸水中，可用磁力攪拌器助其溶解；
5、用濾紙過濾，以盡可能除去雜質(zhì)；
6、用1n稀鹽酸或1n氫氧化鈉調(diào)整bts稀釋液的ph值為7.2(6.8-7.4)左右,滲透壓為330mosm；稀釋液配好，應(yīng)及時貼上標簽，標明品名、配制日期和時間、經(jīng)手人等；
7、要認真檢查已配制好的稀釋液成品，發(fā)現(xiàn)問題及時糾正；
8、液態(tài)狀稀釋液冰箱4℃保存，不超過24小時，超過有效貯存期的變質(zhì)稀釋液應(yīng)廢棄。
精液質(zhì)量的檢查操作規(guī)程
1、精液量：以電子天平稱量精液，按每克1毫升計，避免以量筒等轉(zhuǎn)移精液盛放容器的方法測量精液體積；
2、顏色：正常的精液是乳白色或淺灰白，精子密度越高，色澤愈濃，其透明度愈低。如帶有綠色或黃色是混有膿液或尿液，若帶有淡紅色或紅褐色是含有血液。這樣的精液應(yīng)舍棄不用，會同獸醫(yī)尋找原因；
3、氣味：豬精液略帶腥味，如有異常氣味，應(yīng)廢棄；
4、ph值（酸堿度）：以ph計測量（ph計使用見說明書）；
5、精子活率檢查：活率是指呈直線運動的精子百分率，在顯微鏡下觀察精子活率，一般按0.1-1.0
的十級評分法進行，鮮精活率要求不低于0.7;
6、精子密度：指每毫升精液中所含的精子數(shù)，是確定稀釋倍數(shù)的重要指針。要求用血細胞計數(shù)板進行計數(shù)或精液密度儀測定。血細胞計數(shù)板計數(shù)方法：①以微量加樣品取具有代表性原精液100μl，3%nac l900μl,混勻，使之稀釋10倍；②在血細胞計數(shù)室上放一蓋玻片，取1滴上述精液放入計數(shù)板的槽中，靠虹吸將精液吸入計數(shù)室內(nèi)；③在高倍鏡下計數(shù)5個中方格內(nèi)的精子總數(shù)，將該數(shù)乘以50萬，即得原精液每毫升的精子數(shù)（即精液密度）。精液密度儀使用見其說明書；
7、精子畸形率：畸形率是指異常精子的百分率，一般要求畸形率不超過18％，其測定可用普通顯微鏡,但需伊紅或姬姆沙染色,相差顯微鏡可直接觀察活精子的畸形率,公豬使用過頻或高溫環(huán)境會出現(xiàn)精子尾部帶有原生質(zhì)滴的畸形精子;畸形精子種類很多,如:巨型精子、短小精子、雙頭或雙尾精子，頂體膨脹或脫落、精子頭部殘缺或與尾部分離、尾部變曲。要求每頭公豬每兩周檢查一次精子畸形率；
8、按要求做好精液質(zhì)量檢查登記表；
9、實事求是地填寫種公豬健康狀況登記表，從而真實地反應(yīng)種公豬健康狀況。
精液的稀釋操作規(guī)程
1、精液采集后應(yīng)盡快稀釋，原精貯存不超過30分鐘；
2、未經(jīng)質(zhì)量檢查或檢查不合格（活力0.7以下）的精液不能稀釋；
3、稀釋液與精液要求等溫稀釋,兩者溫差不超過1℃,即稀釋液應(yīng)加熱至33℃-37℃,以精液溫度為標準,來調(diào)節(jié)稀釋液的溫度,絕不能反過來操作；
4、稀釋時,將稀釋液沿盛精液的杯(瓶)壁緩慢加入到精液中,然后輕輕搖動或用消毒玻璃棒攪拌,使之混合均勻；
5、如作高倍稀釋時,應(yīng)進行低倍稀釋（1：1-2）,稍待片刻后再將余下的稀釋液沿壁緩慢加入,以防造成“稀釋打擊”；
6、稀釋倍數(shù)的確定：活率≥0.7的精液,一般按每個輸精劑量含40億個總精子,輸精量為80-90ml確定稀釋倍數(shù),例如：某頭公豬一次采精量是200ml ,活力為0.8,密度為2億/ml,要求每個輸精劑量是含40億精子,輸精量為80ml,則總精子數(shù)為200ml×2億/ml=400億,輸精頭份為400億÷40億=10份，加入稀釋液的量為10×80ml-200ml=600ml；
7、稀釋后要求靜置片刻再作精子活力檢查,如果稀釋前后活力一樣,即可進行分裝與保存,如果活力下降,說明稀釋液的配制或稀釋操作有問題,不宜使用,并應(yīng)查明原因加以改進；
8、不準隨便更改各種稀釋液配方的成分及其相互比例,也不準幾種不同配方稀釋液隨意混合使用；
9、稀釋液的配方見附表。
精液的常溫保存的操作規(guī)程
1、精液稀釋后，檢查精液活率，若無明顯下降，按每頭份80-90 ml分裝；
2、瓶上加蓋密封，并在輸精瓶上寫清楚公豬的品種、耳號，采精日期（月、日、時）；
3、置22℃-25℃的室溫1小時后(或用幾層毛巾包被好后)直接放置17℃冰箱中；
4、保存過程中要求每12小時將精液混勻一次,防止精子沉淀而引起死亡；
5、每天檢查精液保存箱溫度并進行記錄，若出現(xiàn)停電應(yīng)全面檢查貯存的精液質(zhì)量；
6、盡量減少保存精液保存箱關(guān)開次數(shù),以免造成對精子的打擊而死亡。
發(fā)情鑒定技術(shù)的操作規(guī)程
1、母豬發(fā)情周期平均21天（19--23天），大多數(shù)經(jīng)產(chǎn)母豬一般在仔豬斷奶后的一周內(nèi)（3--7天），可再次發(fā)情排卵，配種受胎；
2、母豬發(fā)情周期可分為發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期和間情期，母豬只有在發(fā)情才允許公豬爬跨或稱之為站立反應(yīng)，此性行為表現(xiàn)可作為母豬適時輸精的指標；
3、各期特征，略述如下：①發(fā)情前期：母豬舉動不安，外陰腫脹，并由淡黃色變?yōu)榧t色這種變化在后備母豬較為明顯；陰道有粘液分泌，其粘度漸漸增加。在此期母豬不允許人騎在背上，平均可有2.7天，不宜輸精配種。②發(fā)情期：平均約2.5天，特征為母豬陰部腫脹及紅色開始減退，分泌物也變濃厚，粘度增加。此時母豬允許壓背而不動，壓背時，母豬雙耳豎起向后，后肢緊繃。③發(fā)情后期：1-2天,發(fā)情母豬的陰部完全回復(fù)正常，不允許公豬爬跨；④間情期:13-14天,完全恢復(fù)正常狀態(tài);
4、發(fā)情鑒定：每日最少要做兩次試情（每天上午6：30-8：30和下午16：00-17：30進行發(fā)情檢查），即在安靜的環(huán)境下，有公豬在旁時，壓背，以觀察其站立反應(yīng)。試情公豬一般選用善于交談、唾液分泌旺盛、行動緩慢的老公豬；
5、作好發(fā)情檢查的完整記錄：包括發(fā)情母豬耳號、胎次、發(fā)情時間、外陰部變化、壓背反應(yīng)等，尤其是后備母豬的記錄。
輸精操作規(guī)程
1、輸精次數(shù)：①第1次自然交配、第2、3次人工授精；②2次人工授精；③3次人工授精；
2、輸精時間：①斷奶后3-6天發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母豬，發(fā)情出現(xiàn)站立反應(yīng)后6-12小時進行第1次輸精配種；②后備母豬和斷奶后7天以上發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母豬，發(fā)情出現(xiàn)站立反應(yīng)，就進行配種（輸精）；
3、精液檢查：從17℃保存箱取出的精液,輕輕搖勻,用已滅菌的滴管取1滴放于預(yù)熱的載玻片,置于37℃的恒溫板上片刻,用顯微鏡檢查活力，精液活力≥0.7，才可進行輸精；
4、將試情公豬趕至待配母豬欄之前，使母豬在輸精時與公豬口鼻部接觸；
5、輸精人員消毒清潔雙手；
6、用0.1％高錳酸鉀水溶液清潔母豬外陰、尾根及臀部周圍,再用溫水浸濕毛巾，擦干外陰部；
7、從密封袋中取出沒受任何污染的一次性輸精管（手不應(yīng)接觸輸精管前2/3部分），在其前端涂上精液作為潤滑液；
8、將輸精管45度角向上插入母豬生殖道內(nèi)，輸精管進入3-4cm之后，順時針旋轉(zhuǎn)，當感覺有阻力時，繼續(xù)緩慢旋轉(zhuǎn)同時前后移動，直到感覺輸精管前端被鎖定（輕輕回拉不動），并且確認真正被子宮頸鎖定；
9、從精液貯存箱取出質(zhì)量合格的精液，確認公豬品種、耳號；
10、緩慢顛倒搖均精液，用剪刀剪去瓶嘴，接到輸精管上，開始進行輸精；
11、用針頭在輸精瓶底部扎一個小孔，撫摸母豬的ru房或外陰、壓背刺激母豬，使其子宮收縮產(chǎn)生負壓，將精液吸納；輸精時勿將精液擠入母豬生殖道內(nèi)，防止精液倒流；
12、控制輸精瓶的高低來調(diào)節(jié)輸精時間，輸精時間要求3-5分鐘，輸完一頭母豬后，應(yīng)在防止空氣進入母豬生殖道的情況下，把輸精管后端一小段折起，放在輸精瓶中，使其滯留在生殖道內(nèi)3-5分鐘，讓輸精管慢慢滑落；
13、從17℃精液保存箱中取出的精液，無需升溫至37℃,搖勻后可直接輸精,但檢查精液活力需將玻片預(yù)熱至37℃；
14、經(jīng)產(chǎn)母豬用一次性海綿頭輸精管，輸精前檢查海綿頭是否松動；后備母豬用一次性螺旋頭輸精管。為防止子宮炎發(fā)生，每頭母豬每次輸精都應(yīng)使用一條新的輸精管；
15、每頭母豬在一個發(fā)情期內(nèi)要求至少輸精兩次，最好三次，兩次輸精時間間隔8小時左右；
16、認真登記母豬生產(chǎn)卡、配種記錄。
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