支原體感染所致關(guān)節(jié)炎診斷及治療

　　關(guān)節(jié)炎是指一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)內(nèi)組織發(fā)生炎癥。本病常以關(guān)節(jié)液增加為特征，因致病病原不同而具有其他不同的特征性病變。具有診斷意義的特征性病變包括色澤的變化、關(guān)節(jié)液的混濁度、出血或滲出物等。此外，還可以依據(jù)以下特性對關(guān)節(jié)炎進(jìn)行分類，如：病原、病程(如：急性型、慢性型)、滲出物成分(如：漿液性、纖維素性、化膿性、巨噬細(xì)胞性、淋巴漿細(xì)胞性等)。

　　豬傳染性關(guān)節(jié)炎通常因細(xì)菌性感染所致�？蓮幕加嘘P(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)中分離到如下病原菌：豬丹毒絲菌、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬放線桿菌、化膿性隱秘桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌、豬滑液支原體、豬鼻支原體。

　　因傳染性關(guān)節(jié)炎會(huì)危及動(dòng)物福利，降低豬場經(jīng)濟(jì)效益，故該病逐漸成為困擾生產(chǎn)者的一大問題。雖然很久前已意識到該病及其危害性，但在現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)實(shí)踐中，對其致病機(jī)理、流行病學(xué)與防控措施等方面尚缺乏充分的認(rèn)知。

　　從2003年～2010年愛荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室(ISU-VDL)共接診431例豬跛行的病例。從總體上來看，69%(431例中有289例)的跛行病例為傳染性關(guān)節(jié)炎。在這8年間，支原體所引致的關(guān)節(jié)炎病例的平均比例為17%，但近年來其比例呈上升趨勢，在2010年(見圖1)比例高達(dá)37%(111例中有41例)。 豬鼻支原體通常發(fā)生于≤10周齡以內(nèi)的豬只。而豬滑液支原體多發(fā)生于10周齡以上的豬只(圖2)。但是，因?yàn)檫@些診斷數(shù)據(jù)的固有偏差及樣品采集時(shí)缺乏隨機(jī)性，故很難在臨床實(shí)踐中將以上數(shù)據(jù)與疾病的實(shí)際發(fā)生率相關(guān)聯(lián)。

　　因愛荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室所確診的支原體感染相關(guān)關(guān)節(jié)炎病例呈上升趨勢。本文將重點(diǎn)描述豬滑液支原體與豬鼻支原體感染所致關(guān)節(jié)炎的疾病特征、樣品采集要領(lǐng)及檢測診斷方法等。

　　發(fā)病機(jī)理

　　豬鼻支原體可在豬只上呼吸道繁殖，也可從有肺炎或無肺炎的豬只的肺內(nèi)分離到該病原。但是，通常在斷奶后才可看到全身性病變。該病向全身各處擴(kuò)散的發(fā)生過程尚不清楚，但病原體對漿膜層的專嗜性可導(dǎo)致體腔漿膜與滑膜(沿關(guān)節(jié)腔內(nèi)壁分布的一層膜)發(fā)生急性炎癥。若機(jī)體的免疫系統(tǒng)或藥物未能有效的緩解這些部位的感染，這些急性病變將轉(zhuǎn)為慢性，導(dǎo)致豬只生長緩慢、生產(chǎn)性能差。在慢性感染階段，通�？梢钥吹揭岳w維素性粘連為主要特征的漿液纖維素性胸膜炎、心包炎與腹膜炎等病變。

　　豬只在感染滑液支原體大約2～3周后可發(fā)生關(guān)節(jié)炎。豬滑液支原體主要感染扁桃體，且會(huì)持續(xù)性感染至成年期，偶爾也可能會(huì)造成全身性感染。豬常在遭受應(yīng)激后而感染，如：轉(zhuǎn)群、疫苗免疫等，潛伏期大約3～10天。急性感染期大約持續(xù)2周時(shí)間，在此期間，病原體會(huì)通過血液循環(huán)系統(tǒng)傳染至關(guān)節(jié)及全身各組織(如：脾臟、肺臟等)。

　　母源抗體水平或豬群的免疫狀況、菌株毒力、生產(chǎn)管理或生物安全、豬群品種及飼養(yǎng)環(huán)境等眾多因素均會(huì)影響支原體感染相關(guān)關(guān)節(jié)炎的臨床表現(xiàn)。但是，目前尚不知道以上某一單一因素對疾病致病過程影響的大小。

　　臨床癥狀

　　豬鼻支原體感染可能會(huì)導(dǎo)致多發(fā)性漿膜炎與多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，通常多發(fā)于3～10周齡的豬只，偶發(fā)于其它大齡豬只。豬只常在感染后3～10天表現(xiàn)臨床癥狀，并持續(xù)大約10～14天(依據(jù)疾病嚴(yán)重程度及是否存在混合感染的狀況而有所不同)�；钾i出現(xiàn)食欲不振、精神沉郁、不愿走動(dòng)、跛行、關(guān)節(jié)腫大等臨床表現(xiàn)。此外，結(jié)膜炎與耳炎也常與豬鼻支原體感染有關(guān)。

　　豬滑液支原體感染所引致的豬只跛行常發(fā)生于3～5月齡的豬，常在一只或多只腿發(fā)生急性關(guān)節(jié)炎。患豬呈現(xiàn)的臨床癥狀包括跛行，關(guān)節(jié)腫大、僵硬、疼痛或不適，豬只不愿站立。臨床癥狀可能持續(xù)3～10天，此后跛行的嚴(yán)重性逐漸減緩，很多患豬甚至可自愈。但是當(dāng)存在混合感染或存在如剝脫性骨軟骨炎(osteochondritis dissecans)等關(guān)節(jié)病變時(shí)，臨床癥狀可能會(huì)持續(xù)。患有傳染性關(guān)節(jié)炎并出現(xiàn)跛行的豬只可能呈現(xiàn)或不呈現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大。但大部分患豬在走動(dòng)過程中常會(huì)表現(xiàn)不適或不愿站立，需進(jìn)行進(jìn)一步的檢查評估。

　　動(dòng)物與樣品的選擇與采集程序

　　應(yīng)選擇臨床癥狀為跛行、關(guān)節(jié)腫大、不愿站立、頻繁交替承重肢(shifting hind-limb lameness),或走路時(shí)步態(tài)痛苦或不自然的保育豬、生長豬及育肥豬。最好選擇發(fā)病急且未經(jīng)過抗生素治療的患豬用于實(shí)驗(yàn)室診斷。具有長時(shí)間跛行、關(guān)節(jié)蓄膿、躺臥、消瘦等臨床癥狀的慢性病豬常存在其它混合感染，將阻礙診斷準(zhǔn)確性，應(yīng)盡量不要挑選這種患豬用于診斷。送檢的患豬在采樣前應(yīng)首先進(jìn)行安樂死。應(yīng)盡量避免送檢已經(jīng)病死的豬只，因?yàn)椴∝i的疾病發(fā)展過程可能是慢性的或因非傳染性因素而致死，無法對病死豬進(jìn)行臨死前檢查，或以上因素兼而有之。

　　依據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測的目的來決定正確的采樣程序。一般來說，實(shí)驗(yàn)室檢測有兩個(gè)不同的目的。第一：某一特定臨床病例的確診;第二：對疾病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，以了解某一特定的群體中某種疾病的流行狀況、發(fā)病率或易感豬的大小等信息。

　　雖然豬滑液支原體與豬鼻支原體可能存在于未感染動(dòng)物的上呼吸道，但欲確診支原體感染相關(guān)的關(guān)節(jié)炎需要在患豬關(guān)節(jié)中檢測到病原體的存在，并觀察到滑液組織中呈現(xiàn)特征性組織病理病變。

　　在對患豬進(jìn)行臨床觀察后進(jìn)行病理剖檢，并對所有關(guān)節(jié)與全身各系統(tǒng)的病變進(jìn)行觀察評估。觀察到漿液纖維素性或纖維素性膿液性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎等大體病變則預(yù)示著可能存在豬鼻支原體感染。但副豬嗜血桿菌與豬鏈球菌感染也可引致相似的病變。豬滑液支原體感染時(shí)，關(guān)節(jié)中通常有大量的黃色或黃褐色的漿液性纖維素性的或漿液性出血性的粘液�；�膜層色澤較暗，呈現(xiàn)水腫、增生或充血等病變。

　　切開肘部、膝關(guān)節(jié)、跗關(guān)節(jié)、肩關(guān)節(jié)等處的皮膚，對局部進(jìn)行消毒以降低外源病原感染的機(jī)率，然后利用適宜大小的針頭從以上關(guān)節(jié)腔內(nèi)收集滑液(見圖3A)。也可向獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室送檢患病完整的豬腿，以代替送檢組織樣品與關(guān)節(jié)液。

　　當(dāng)發(fā)現(xiàn)纖維素性胸膜炎時(shí)，應(yīng)送檢肺臟組織，此時(shí)應(yīng)懷疑可能存在豬鼻支原體感染。若出現(xiàn)大量的滲出液或多發(fā)性漿膜炎時(shí)，也可以送檢心包液、胸腔液與腹腔液。當(dāng)多發(fā)性漿膜炎比較嚴(yán)重時(shí)，也可以送檢新鮮的或經(jīng)過福爾馬林固定過的心臟，或其它腹腔組織器官，如肝臟、脾臟等。

　　當(dāng)關(guān)節(jié)腔內(nèi)關(guān)節(jié)液較少時(shí)，也可在仔細(xì)切開關(guān)節(jié)后，利用多個(gè)拭子無菌收集關(guān)節(jié)液(見圖3B)。采集多片滑膜組織，并浸泡在10%的福爾馬林中以用于組織病理學(xué)觀察。確診時(shí)，除了發(fā)現(xiàn)病原體外，還應(yīng)觀察到特征性病理組織學(xué)病變。也可對感染部位進(jìn)行外科消毒處理后，使用無菌注射器與針頭從活豬腫大的關(guān)節(jié)內(nèi)采集關(guān)節(jié)液。這種操作的優(yōu)點(diǎn)在于不需對豬只進(jìn)行安樂死。但是，這種樣品采集方法會(huì)使豬只感覺不適，通常需要先對豬進(jìn)行鎮(zhèn)定后再進(jìn)行采樣�！�

　　圖3：A.在實(shí)驗(yàn)室診斷之前，從臨床表現(xiàn)為跛行的6周齡仔豬關(guān)節(jié)腔內(nèi)采集關(guān)節(jié)液。

　　B.利用棉拭子從關(guān)節(jié)腔內(nèi)采集樣品用于檢測。(照片來自愛荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室)

　　通過對從斷奶至育肥不同生長階段的豬群進(jìn)行有代表性的采樣檢測，可判定支原體感染在某一豬群中的流行狀況，也可對某一特定的豬群持續(xù)性的采樣監(jiān)測一段時(shí)間，以從縱向角度判定支原體感染所致的關(guān)節(jié)炎在該豬群的流行狀況。有代表性的采樣檢測分析可了解某一特定豬群在某一段時(shí)期內(nèi)支原體陽性患豬的數(shù)量。但此方法的不足之處是：所選豬群的支原體流行狀況可能無法代表整個(gè)豬群。故為了判定豬群滑液支原體或豬鼻支原體的感染時(shí)間或判斷陽性豬群的感染狀況，更適合采用從水平角度研究或?qū)ωi群進(jìn)行持續(xù)性研究的方法。但是，無論哪種方法，都需要根據(jù)疾病發(fā)生狀況與豬群狀態(tài)(如：若豬群胎次結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，所需研究的動(dòng)物組數(shù)可少些)來選取多組動(dòng)物進(jìn)行研究分析。應(yīng)分別采集鼻腔拭子與扁桃體刮取物樣品，不可將兩種樣品混合后再進(jìn)行綜合分析。因?yàn)楸乔皇米訕悠分谐��?huì)檢測到豬鼻支原體，而扁桃體刮取物更適于豬滑液支原體的檢測。

　　送檢樣品

　　向獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室送檢樣品時(shí)應(yīng)完整而詳細(xì)的了解疫病的病史與臨床狀況等。完整的病史信息包括描述發(fā)病動(dòng)物的臨床癥狀、大小、數(shù)量、死亡率及鑒別診斷等信息。在向診斷實(shí)驗(yàn)室提交關(guān)節(jié)液或滲出液前應(yīng)將樣品轉(zhuǎn)移到聚苯乙烯管內(nèi)以避免樣品在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生泄漏、交叉污染或損壞等。應(yīng)將關(guān)節(jié)液或其拭子、組織樣品、滲出液、完整關(guān)節(jié)或四肢等樣品放置在冰塊上，并在采集樣品后24小時(shí)內(nèi)送至獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室。轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)應(yīng)將拭子樣品放置在轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基內(nèi)(如：Amies運(yùn)送培養(yǎng)基)以防止樣品脫水。浸泡在10%的福爾馬林溶液中的組織樣品應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)識、包裝等處理，以防止溶液發(fā)生泄漏。若不具備適宜的樣品采集條件或設(shè)備，可送檢感染豬只的整個(gè)豬腿或整個(gè)活豬只，且最好選擇急性發(fā)病豬。所有送檢至獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)保持新鮮，在輸運(yùn)前或運(yùn)輸過程中應(yīng)處于冷藏狀態(tài)。

　　診斷分析

　　實(shí)時(shí)定量PCR是迄今為止最敏感的支原體檢測方法。目前已將實(shí)時(shí)定量PCR方法用于豬鼻支原體與豬滑液支原體的檢測，該法可直接用于臨床樣品(如關(guān)節(jié)液)、關(guān)節(jié)拭子、鼻腔拭子或扁桃體刮取物等的檢測。也可以根據(jù)需要進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。若有必要，也可對所分離培養(yǎng)的菌株進(jìn)行進(jìn)一步的特性分析，如進(jìn)行抗生素耐藥性分析等。但細(xì)菌分離培養(yǎng)是件非常耗時(shí)的工作，有時(shí)會(huì)因其它細(xì)菌的過度生長而影響分離培養(yǎng)的結(jié)果。支原體只有在特定的培養(yǎng)基內(nèi)才能夠生長，這對支原體的分離培養(yǎng)工作提出了特殊的要求。

　　觀察支原體感染所造成的特征性組織病理病變對于確診支原體感染所致的關(guān)節(jié)炎是非常有必要的�；�液支原體感染的微觀病變包括滑膜異常增生，滑膜絨毛中等程度的增生、水腫并伴隨有單核細(xì)胞浸潤性炎。豬鼻支原體感染�？蓪�(dǎo)致漿膜與滑膜內(nèi)有大量的單核細(xì)胞與嗜中性粒細(xì)胞浸潤，從而導(dǎo)致慢性感染的患豬軟骨受侵蝕、關(guān)節(jié)翳形成。

　　對于支原體陽性豬群，仔豬體內(nèi)的母源抗體可持續(xù)至斷奶后的一段時(shí)間，但母源抗體具體的持續(xù)期尚未研究清楚。對某一特定豬群斷奶仔豬的抗體水平進(jìn)行持續(xù)性監(jiān)測可用來確定豬群感染支原體的時(shí)間。即使在豬體內(nèi)監(jiān)測不到支原體抗體的情況下，PCR檢測結(jié)果呈陽性也是很常見的。豬群在試驗(yàn)條件下感染滑液支原體后，其體內(nèi)抗體可持續(xù)6個(gè)月。支原體在豬扁桃體內(nèi)的感染程度常與患豬的抗體水平呈正相關(guān)。同樣，上市豬體內(nèi)的支原體抗體水平越高，其扁桃體內(nèi)存在支原體感染的可能性越大。

　　圖4：A 樣品來自于12周齡的生長豬，患豬臨床表現(xiàn)為跛行，利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測患豬關(guān)節(jié)液，滑液支原體呈陽性。病理切片顯示慢性增生性滑膜炎，滑膜發(fā)生單核細(xì)胞浸潤性炎癥，滑膜細(xì)胞增生肥大(箭頭所示)(H&E染色，放大倍數(shù)：100倍)。B：樣品來自6周齡的仔豬，患豬關(guān)節(jié)腫大，利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測患豬關(guān)節(jié)液，豬鼻支原體呈陽性。星號(*)表示滑膜呈現(xiàn)纖維素性化膿性炎，滑膜下結(jié)締組織內(nèi)有大量單核細(xì)胞與嗜中性粒細(xì)胞。箭頭表示滑膜細(xì)胞增生肥大。(H&E染色，放大倍數(shù)：100倍)。照片來自于愛荷華州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室。

　　為正確診斷支原體所致的關(guān)節(jié)炎，請牢記：

　　l 對病程進(jìn)行準(zhǔn)確而徹底的調(diào)查對于豬跛行病因的確診至關(guān)重要。

　　2應(yīng)挑選未經(jīng)治療且急性發(fā)病的跛行豬只送至獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確診。

　　3應(yīng)將關(guān)節(jié)液、關(guān)節(jié)拭子、經(jīng)10%的福爾馬林處理過的滑膜或患豬的整個(gè)豬腿送至獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行跛行原因診斷分析。

　　4PCR檢測、關(guān)節(jié)液或拭子培養(yǎng)等方法對于確診是否存在支原體感染非常有幫助。

　　5對支原體感染所致關(guān)節(jié)炎的確診需要確認(rèn)存在病理病變，同時(shí)確定感染組織中存在病原體。

　　6若存在其它任何問題，請及時(shí)與獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行溝通。

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