副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)是豬上呼吸道的一種常在細(xì)菌。這種細(xì)菌在環(huán)境中普遍存在,世界各地都有,甚至是健康的豬群當(dāng)中也能發(fā)現(xiàn)。在特定的條件下可引起嚴(yán)重的全身性疾病,其主要特征是以纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎為主,該病原引起的疾病又被稱(chēng)為革拉氏病(Glasser's disease）。
隨著世界養(yǎng)豬業(yè),規(guī)�；^(qū)域化、集中化的發(fā)展及高度密集飼養(yǎng)模式
技術(shù)的應(yīng)用，以及突發(fā)新的呼吸道綜合征等因素存在，使得該病日趨流行,危害日漸嚴(yán)重,已逐漸演變?yōu)橐环N世界范圍內(nèi)流行的重要疾病。
副豬嗜血桿菌 歷史來(lái)源
1910年，德國(guó)科學(xué)家K.Glasser首次報(bào)道了豬的漿液性纖維素性胸膜炎、心包炎以及腦膜炎患豬的漿液性分泌物中存在一種革蘭氏陰性桿菌，并發(fā)現(xiàn)了這種革蘭氏陰性菌和豬多發(fā)性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎之間存在一定聯(lián)系。
1922年，Schermer和Ehrlic首次分離得到這種革蘭氏陰性細(xì)小桿菌，在顯微鏡下觀察成多形態(tài)，非溶血，不運(yùn)動(dòng)。
1931年，Lewis在研究豬流感時(shí)發(fā)現(xiàn)了這一細(xì)菌與豬流感的發(fā)生聯(lián)系緊密，并對(duì)革拉氏病的病原菌進(jìn)行了早期生化鑒定，結(jié)果表明該菌與豬嗜血桿菌非常相似，在生長(zhǎng)中都需要X(鐵葉琳)和V(煙酸胺腺嘿吟二核普酸)兩種因子，所以在當(dāng)時(shí)建議將該菌命名為流感嗜血桿菌。
1943年，Hjarre和Wramby經(jīng)過(guò)研究將此菌命名為豬嗜血桿菌。
1969年，Biberstein和White的研究表明副豬嗜血桿菌的生長(zhǎng)只需要V因子。根據(jù)國(guó)際公認(rèn)的使用“Para-''作為前綴為生長(zhǎng)不需要X因子參與的微生物命名的原則，提出“副豬嗜血桿菌”(Haemophilus parasuis)命名為這一種新的細(xì)菌名稱(chēng)。
副豬嗜血桿菌 病原特性
在伯杰氏細(xì)菌分類(lèi)手冊(cè)中，副豬嗜血桿菌隸屬于巴斯德菌科嗜血桿菌屬，是一種非溶血性、無(wú)運(yùn)動(dòng)性、依賴(lài)NAD、細(xì)小的革蘭氏陰性桿菌。具有多形性，呈逗點(diǎn)狀、棒狀、絲狀及不同形態(tài)的桿狀。另報(bào)道在雞胚絨毛尿囊膜上生長(zhǎng)時(shí)，副豬嗜血桿菌可形成絲狀形態(tài)，并產(chǎn)生菌毛樣結(jié)構(gòu)。
HPS無(wú)芽孢，部分菌株通常具有莢膜，在1986年Mororumi和Nicolet報(bào)道了具有莢膜的HPS大多分離自健康豬上呼吸道，而無(wú)莢膜的HPS則多數(shù)從其它部位分離到。2006年，國(guó)內(nèi)Jin H等研究了15個(gè)不同血清型的參考株和80個(gè)臨床分離株副豬嗜血桿菌的生物被膜，結(jié)果表明大約43%的菌株在聚苯烯平板上有不同程度的生物被膜形成能力，沒(méi)有生物被膜形成能力的副豬嗜血桿菌通過(guò)體內(nèi)傳代也不能形成生物膜。無(wú)毒力菌株比有毒力菌株表現(xiàn)出更高程度的生物被膜形成能力，且在培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)生物被膜不會(huì)受影響。人工感染豬鼻腔中的分離株仍有生物被膜存在，而肺臟和大腦的分離株沒(méi)有形成生物被膜的能力。
HPS對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格，該菌生長(zhǎng)時(shí)嚴(yán)格需要煙酞胺腺鏢吟二核昔酸(NAD或V因子)，而不需要血紅素和其它葉琳類(lèi)物質(zhì)(X因子)。V因子存在于血液及某些植物組織中，在細(xì)菌的呼吸中起遞氫作用。實(shí)驗(yàn)室使用的含羊紅細(xì)胞的血瓊脂中含有X因子及V因子，但血液中的V因子通常處于被抑制狀態(tài)，V因子依賴(lài)性的嗜血桿菌通常不能在含有完整紅細(xì)胞的羊血瓊脂上生長(zhǎng)。當(dāng)血液加熱后，細(xì)胞膜上的抑制物被破壞，V因子釋放后的新鮮血液才能生長(zhǎng)。所以在實(shí)驗(yàn)室分離HPS時(shí)通常使用巧克力瓊脂培養(yǎng)基，即鮮血瓊脂加熱80℃～90 ℃,5～15 min 。但HPS在巧克力培養(yǎng)基上生長(zhǎng)困難。HPS在適宜的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈圓形、隆起、表面光滑、邊緣整齊、灰白色半透明的針尖大小的菌落。菌落的大小可因菌株和培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)程度不同而異。如果與金黃色葡萄球菌劃線(xiàn)共培養(yǎng)，可見(jiàn)到靠近葡萄球菌菌落的HPS。生長(zhǎng)良好，菌落較大，菌落直徑可達(dá)1~2mm，而遠(yuǎn)離葡萄球菌菌落的HPS菌落較小，這種現(xiàn)象稱(chēng)為“衛(wèi)星現(xiàn)象”。因?yàn)槠咸亚蚓車(chē)傊腥芙獾募t細(xì)胞可提供X因子，而葡萄球菌本身在生長(zhǎng)時(shí)分泌V因子，釋放到培養(yǎng)基中，從而促進(jìn)HPS的生長(zhǎng)。
HPS的生化反應(yīng)較弱,對(duì)糖類(lèi)發(fā)酵多不穩(wěn)定,發(fā)酵葡萄糖、蔗糖,不發(fā)酵甘露糖、木糖、L-阿拉伯糖、蜜三糖,少數(shù)菌株發(fā)酵乳糖。鳥(niǎo)氨酸脫竣酶、精氨酸雙水解酶及叫垛試驗(yàn)為陰性；氧化酶陽(yáng)性和接觸酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性。
HPS對(duì)環(huán)境敏感，在外界環(huán)境中的死亡速度非�？�。其無(wú)芽抱，無(wú)鞭毛，為需氧或兼性厭氧菌;最適生長(zhǎng)溫度35～37℃,pH 7.6～7.8。HPS在試驗(yàn)中接種用的培養(yǎng)基和稀釋介質(zhì)可能對(duì)HPS的活力產(chǎn)生影響。Morozumi和Hiramune等研究了不同溫度條件下副豬嗜血桿菌在生理鹽水和PBS中的存活能力。當(dāng)HPS存在于生理鹽水中42 ℃1 h,37℃2h及25℃8 h，即不能檢測(cè)到HPS活菌；5℃8 h,HPS的濃度輕微下降;當(dāng)HPS置于PBS中時(shí)，也觀察到相似的結(jié)果。Reilly和Niven等研究了胰蛋白陳-酵母提取物肉湯作為攻毒接種用的培養(yǎng)介質(zhì)，發(fā)現(xiàn)處于生長(zhǎng)穩(wěn)定期的HPS繼續(xù)培養(yǎng)后，活性顯著降低。另有研究報(bào)道，HPS培養(yǎng)大約10h后向培養(yǎng)基中補(bǔ)充外源性神經(jīng)氨酸可使細(xì)菌的終濃度高于沒(méi)有補(bǔ)充外源性神經(jīng)氨酸的細(xì)菌的終濃度，這表明在細(xì)菌的培養(yǎng)過(guò)程中需外源性神經(jīng)氨酸。
副豬嗜血桿菌 血清分型
血清型分型
方法在傳統(tǒng)上主要是基于熱穩(wěn)定可溶性抗原和瓊脂凝膠沉淀實(shí)驗(yàn)。目前為止通過(guò)血清分型方法可以將副豬嗜血桿菌鑒定劃分為至少15種血清型,各血清型菌株在毒力方面有著較大的差異。但是大約還有20%的菌株到目前為止用此方法還不能分型。研究報(bào)道表明在日本,德國(guó)、美國(guó)以血清4型和5型是主要流行的優(yōu)勢(shì)血清型。而在澳大利亞副豬嗜血桿菌的優(yōu)勢(shì)血清型主要是5型和13型。在巴西的主要流行血清型是4型,5型,14型。在加拿大,副豬嗜血桿菌的優(yōu)勢(shì)血清型也是4型和5型。在中國(guó),副豬嗜血桿菌的優(yōu)勢(shì)血清型為4型，5型, 13型。國(guó)內(nèi)有研究者證實(shí)目前副豬嗜血桿菌流行毒株為血清5型和血清4型為優(yōu)勢(shì)血清型，其他型占的比例較小。
圖1 不同國(guó)家豬副嗜血桿菌流行狀況
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