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在現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中，為減少豬病的發(fā)生和流行，除加強(qiáng)豬場(chǎng)的隔離消毒，減少環(huán)境中的病毒等生物安全措施外，還必須制定合理的免疫程序，使得豬體內(nèi)長(zhǎng)期保持抵抗豬病強(qiáng)毒攻擊的有效抗體，而要了解豬體內(nèi)的有效抗體水平，就必須開(kāi)展豬病免疫抗體水平監(jiān)測(cè)。目前對(duì)抗體水平檢測(cè)方法很多，如 ELISA檢測(cè)法、DOT-ELISA檢測(cè)法和間接血凝法等，這些檢測(cè)技術(shù)雖然具有微量、特異的優(yōu)點(diǎn)，但需要條件較好、設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)室和經(jīng)過(guò)專門(mén)訓(xùn)練，具有較高的獸醫(yī)微生物專業(yè)技術(shù)水平的人員操作，1次檢測(cè)至少需要4個(gè)小時(shí)。檢測(cè)程序繁瑣，對(duì)操作人員要求專業(yè)性高，不適合基層獸醫(yī)站和養(yǎng)殖場(chǎng)使用。
免疫抗體金標(biāo)試紙條快速檢測(cè)卡是建立在單克隆抗體的基礎(chǔ)上，其檢測(cè)結(jié)果的特異性及靈敏度大大提高，而且樣品不必預(yù)處理，也大大降低了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的人為誤差和工作強(qiáng)度；實(shí)際操作中只需要按照產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行簡(jiǎn)單的操作，不需要任何儀器設(shè)備，已廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)中，適用于不同的檢疫和診斷機(jī)構(gòu)，更適合于基層獸醫(yī)站及養(yǎng)殖場(chǎng)，為動(dòng)物疫病的早期診斷和適時(shí)免疫提供了新的技術(shù)手段。
1、原理(以豬瘟為例說(shuō)明)
豬瘟抗體快速檢測(cè)試紙采用酶聯(lián)免疫原理和膠體金層折技術(shù)制成，快速檢測(cè)豬血清(或血液)中的豬瘟抗體，將豬瘟抗原包被在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線(T)上，兔抗豬瘟抗體包被在硝酸纖維素膜的質(zhì)控線(C)上，用膠體金標(biāo)記的豬瘟抗原干燥后置于玻璃纖維素膜下端。當(dāng)血清加入加樣孔內(nèi)，由于層析的原理，血清開(kāi)始沿紙條移動(dòng)擋遇上干燥的金標(biāo)抗原，將其溶解，并帶著金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移動(dòng)，至硝酸纖維素膜的檢測(cè)線。如果樣品中有豬瘟抗體存在時(shí)，會(huì)與玻璃纖維素膜上的金標(biāo)豬瘟抗原和包被在檢測(cè)線上的豬瘟抗原，在檢測(cè)線(T)上形成一個(gè)夾心的免疫復(fù)合物，呈一條紫紅色線。樣品中的抗體越高，色線顏色越深，判定為陽(yáng)性。如果樣品中沒(méi)有豬瘟抗體，在檢測(cè)線(T)上沒(méi)有色帶出現(xiàn)，判定為陰性。樣品和金標(biāo)抗原繼續(xù)往上移至質(zhì)控線(C)時(shí)，此處的兔抗瘟抗體將會(huì)同金標(biāo)豬瘟抗原結(jié)合，在質(zhì)控線(C)上形成一條紫紅色線，證明本試紙有效。整個(gè)試驗(yàn)僅需5-20分鐘。操作簡(jiǎn)便，快速，靈敏度高，準(zhǔn)確率達(dá)98％以上，直觀，結(jié)果容易判定。口蹄疫、偽狂犬、藍(lán)耳病檢測(cè)原理同豬瘟。
2、豬病抗體快速檢測(cè)卡使用方法(以豬瘟為例說(shuō)明)
2．1 操作步驟
2．1．1 在檢測(cè)卡的加樣孔內(nèi)加入2滴(60-100llL)待檢的血清或血液樣品(血液樣品最好加滿樣孔)。
2．1．2 將測(cè)試卡平放在桌面上，室溫下靜置5-20分鐘，判斷結(jié)果。超過(guò)30分鐘，檢測(cè)結(jié)果只能作為參考。
2．2 結(jié)果判定
2．2．1 陽(yáng)性 在檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)同時(shí)出現(xiàn)紫紅色線。豬瘟抗體滴度越高，檢測(cè)線(T)的顏色越深；若檢測(cè)線(T)出現(xiàn)的紫紅色線顏色很淺，則說(shuō)明為弱陽(yáng)性。
2．2．2 陰性 只在質(zhì)控線(C)出現(xiàn)一條紫紅色線。
2．2．3 失效 在檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)都不出現(xiàn)紫紅色線，視為失效。
2．3 診斷參
2．3．1 當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線(T)條帶的色澤≥對(duì)照卡中豬瘟為1：16(口蹄疫為1：64，偽狂犬為1：40)效價(jià)時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品牛豬瘟抗體的滴度較高，不需進(jìn)行豬瘟疫苗接種免疫。
2．3．2當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線(T)條帶的色澤<對(duì)照卡中豬瘟為1：16(口蹄疫為1：64，偽狂犬1：40)效價(jià)時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬瘟抗體效價(jià)不能有效抵抗豬瘟強(qiáng)毒攻擊，這時(shí)應(yīng)該及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗接種。
2．3．3 當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線(T)處無(wú)明顯色帶出現(xiàn)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中無(wú)豬瘟抗體或抗體水平很低。如果動(dòng)物群體健康，應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗接種；如果動(dòng)物群體中有個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)疑似豬瘟病時(shí)，則可作為診斷豬瘟病的一個(gè)參考依據(jù)。
2．4 檢測(cè)范圍
2．4．1 外調(diào)種豬須逐個(gè)檢測(cè)，育肥豬按10％～15％比例抽檢。?
2．4．2 自繁種豬檢測(cè)，豬瘟效價(jià)應(yīng)不低于1：32(口蹄疫為1：128，偽狂犬為1：80)，抽檢比例為10%～20%。
2．4．3仔豬出生首日至5日齡，測(cè)其母源抗體，首免后15-20天，二免后10-15天進(jìn)行抗體檢測(cè)，檢測(cè)比例為3％-5％，豬瘟效價(jià)不能低于1：16(口蹄疫為1：64，偽狂犬為1：40)。
2．5 注意事項(xiàng)
2．5．1 檢測(cè)卡從鋁箔袋取出后應(yīng)盡快使用，受潮后檢測(cè)卡將失效。
2．5．2 檢測(cè)卡應(yīng)在4qC保存，可保存較長(zhǎng)時(shí)間。室溫下保存有效期為1年。?
2．5．3 口蹄疫、偽狂犬、藍(lán)耳病抗體檢測(cè)卡使用方法同豬瘟。?
3、檢測(cè)卡在現(xiàn)代養(yǎng)豬保健中的作用(以豬瘟為例說(shuō)明)
3．1 檢測(cè)卡可用于檢驗(yàn)豬瘟疫苗的質(zhì)量和確定免疫的最適劑量。如養(yǎng)豬專業(yè)戶或大型養(yǎng)豬場(chǎng)購(gòu)買大批量的豬瘟疫苗放在自己場(chǎng)里的冰箱冷凍層內(nèi)，每次最好購(gòu)買同一批號(hào)
[FS:PAGE](一般以生產(chǎn)日期定批號(hào))的豬瘟疫苗。可以從中取出一瓶疫苗，選擇不同日齡的乳豬、小豬、種豬若干頭，分別應(yīng)用2頭份、3頭份、4頭份、5頭份豬瘟疫苗進(jìn)行免疫接種，免疫15天后采血，用抗體免疫金標(biāo)檢測(cè)卡測(cè)定抗體滴度。如果各組都能產(chǎn)生抵抗豬病強(qiáng)毒攻擊的免疫抗體時(shí)，則可以從中選擇免疫頭份少，抗體滴度高作為本批號(hào)疫苗最佳免疫劑量。如果檢測(cè)的豬瘟抗體達(dá)不到強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)強(qiáng)度時(shí)，則應(yīng)當(dāng)檢查是否是疫苗本身問(wèn)題，還是豬群存在有免疫抑制病毒(如圓環(huán)病毒)的干擾。這時(shí)可以采取更換該廠家不同批號(hào)的豬瘟疫苗或另選廠家的豬瘟疫苗，再按上述方法進(jìn)行不同劑量免疫，來(lái)確定是否是該批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干擾，判定適宜的免疫劑量。3．2 當(dāng)母豬分娩時(shí)，用豬瘟抗體免疫金標(biāo)試紙檢測(cè)卡檢測(cè)母豬的抗體水平。如果在試紙條上只出現(xiàn)1條色線(質(zhì)控線C)，說(shuō)明母豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度已低于抵抗豬瘟強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)強(qiáng)度，母豬應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗接種，同時(shí)乳豬應(yīng)當(dāng)及時(shí)采用超前免疫，以免發(fā)生豬瘟病。如果試紙條上出現(xiàn)2條色線，說(shuō)明豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度較高，可以抵抗豬瘟強(qiáng)毒的攻擊，就不需要進(jìn)行超前免疫。因?yàn)樽胸i可以通過(guò)初乳獲得母源抗體，這時(shí)仔豬可以按照正常的免疫程序進(jìn)行預(yù)防注射。
3．3 當(dāng)從外地購(gòu)進(jìn)大批量的小豬或種豬時(shí)，飼養(yǎng)主自己無(wú)法了解購(gòu)買的小豬是否進(jìn)行過(guò)豬瘟疫苗免疫或免疫是否有效，應(yīng)使用檢測(cè)卡。為了防止豬瘟病發(fā)生，選擇什么時(shí)間再進(jìn)行豬瘟免疫最適宜時(shí)，則可以根據(jù)不同地區(qū)、不同日齡的豬，選擇有代表性的豬采血，應(yīng)用豬瘟抗體免疫金標(biāo)檢測(cè)卡進(jìn)行快速檢測(cè)。通過(guò)檢測(cè)結(jié)果，可以了解整個(gè)豬群豬瘟抗體的狀況，以便決定是否及時(shí)開(kāi)展免疫及選擇適宜的免疫劑量，這樣可以避免豬瘟病的發(fā)生。?
3．4 在懷疑發(fā)生豬瘟病時(shí)，可以采集病豬血清(或血液)用豬瘟金標(biāo)檢測(cè)卡檢測(cè)。如果發(fā)生豬瘟病，豬體血液中沒(méi)有豬瘟抗體或抗體滴度很低。當(dāng)然，發(fā)生豬瘟而耐過(guò)不死的豬，抗體滴度可能會(huì)很高。
3．5 進(jìn)行疫病監(jiān)測(cè)時(shí)，可應(yīng)用抗體免疫金標(biāo)檢測(cè)卡進(jìn)行快速檢測(cè)。如豬場(chǎng)發(fā)生豬瘟病時(shí)，常規(guī)的處理程序是全面隔離消毒和緊急預(yù)防注射。此時(shí)豬群特別是種豬場(chǎng)的豬群的抗體滴度差異很大，緊急預(yù)防注射疫苗后的抗體滴度水平又會(huì)出現(xiàn)明顯的差異。因此，還應(yīng)當(dāng)重新了解豬瘟抗體水平，以制定合理的免疫程序，確保豬場(chǎng)的科學(xué)保健。
