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1.口蹄疫血清學(xué)效力檢測替代方法
通過檢測疫苗免疫后的抗體滴度水平來評價疫苗免疫效力，檢測方法主要包括病毒中和試驗和各種ELISA試驗。1968年，Stellman等¨馴提出了用中和抗體滴度分析疫苗效力的統(tǒng)計學(xué)方法;到1976年，Pay等¨引根據(jù)中和抗體滴度和疫苗效力的關(guān)系建立了疫苗的抗原劑量、中和抗體滴度和保護率的相關(guān)公式。世界各國的研究工作者都嘗試用血清學(xué)方法評價疫苗的效力，以替代本動物的效力檢驗方法，取得了一定的進展。上世紀80年代，Black等Ⅲ1提出抗體平均值預(yù)測方法，試驗建議用平均中和抗體滴度1.7410910作為疫苗合格的判斷標(biāo)準。2003年，Bar-nett等舊川采用bootstrap的方法進行疫苗效力測定，試驗首先通過統(tǒng)計分析獲得回歸方程，將免疫21d測定的中和抗體結(jié)果代入公式預(yù)算某個稀釋度的疫苗保護率。2007年，Coils等怕1采用回歸方程結(jié)合ROC(Receive Operating Characteristic)曲線確定了抗體滴度最佳臨界點和可疑值范圍，用最佳臨界點來預(yù)測某個動物是否保護，然后再計算PD卯。血清學(xué)試驗不需要在動物舍內(nèi)進行有毒性的操作，減少了病毒向外界散播的危險;不需要對動物進行攻毒，消除了攻毒試驗給動物帶來的損害；還省去了攻毒后的觀察期，縮短了試驗周期�？贵w滴度測定使試驗從定性(死亡或出現(xiàn)臨床癥狀)走向了定量，排除了人為判定誤差或試驗動物健康狀況影響試驗結(jié)果;與攻毒程序相比，血清學(xué)試驗可以對試驗樣品進行保存，當(dāng)產(chǎn)品上市出現(xiàn)問題或管理機構(gòu)要對疫苗進行復(fù)檢時可應(yīng)用保存的樣品進行重復(fù)試驗。有的動物有很高的抗體梯度，但攻毒后仍然發(fā)病;有的動物幾乎檢測不到抗體，但卻受到了保護，這些現(xiàn)象表明僅靠抗體水平衡量動物是否被保護是欠妥的。由于不同試驗室所用的檢測方法、試劑以及判斷標(biāo)準等方面難以統(tǒng)一，以至這類研究結(jié)果應(yīng)用于實際生產(chǎn)中存在困難。另外，檢測免疫血清抗體效價須用非口蹄疫疫苗免疫動物，無法從根本上取代本動物的使用，動物的選擇仍存在困難。
2.疫苗抗原定量方法
FMDV在蔗糖密度梯度離心時根據(jù)沉降系數(shù)不同可以分為幾種病毒粒子，分別是完整病毒(146S)、空衣殼(75S)、病毒感染相關(guān)成分(45S)和12S蛋白亞單位(12S)。146S抗原顆粒是口蹄疫疫苗中使動物機體產(chǎn)生保護性的主要免疫原成分，因此146S抗原顆粒的含量被視為與口蹄疫疫苗的效力具有平行關(guān)系。上世紀70年代，各種146S抗原顆粒定量的方法相繼報道，如免疫擴散法，蔗糖密度梯度離心法，ELISA抗原定量法等，其中較常用的方法是蔗糖密度梯度離心法。1971年，F(xiàn)ayet等舊1首次建立了用紫外光定量蔗糖梯度中口蹄疫病毒粒子146S抗原顆粒的方法；1974年，Barreling等舊。在此基礎(chǔ)上做了改進，使此方法更加精確敏感。DoelⅢo進一步發(fā)展和標(biāo)準化了這個方法，并于1982年向OIE正式推薦了這個方法。1990年，Junsuke等哺。用蔗糖密度梯度離心法對口蹄疫滅活疫苗中的146S抗原顆粒純化后，用軟件CDS系統(tǒng)對146S抗原顆粒實現(xiàn)了電腦自動化定量。有研究者還開展了146S抗原顆粒含量與疫苗的本動物效力(PD∞)相關(guān)性的研究。試驗證明，在一定的范圍內(nèi)，146S抗原顆粒的含量與疫苗效力有相關(guān)性。Rweyemamuml分析了口蹄疫滅活疫苗中抗原含量與免疫動物抗體水平的關(guān)系，確定了牛的抗體水平與疫苗146S抗原顆粒含量呈0.16log。
目前，豬場動力網(wǎng)感謝您的訪問。體外抗原定量試驗替代滅活疫苗的效力試驗存在一些障礙：其一，大量的疫苗產(chǎn)品中含有佐劑等成分，抗原在進行測定之前必須與疫苗中的其他成分分開，并且要保證抗原的完整性;其二，免疫試劑對146S抗原顆粒定量測定存在一些干擾，比如用ELISA方法測定抗原含量時，ELISA中的單克隆抗體不能完全辨別抗原的所有功能區(qū)域，從而使抗原的量化不能完全反映抗原的免疫原性和本動物接種疫苗后一系列復(fù)雜的免疫反應(yīng)。
3.總結(jié)和展望
口蹄疫滅活疫苗本動物效力檢驗替代方法的探索是國內(nèi)現(xiàn)面臨和亟待解決的一個問題，有效的替代方法應(yīng)該具有很好的特異性、敏感性和重復(fù)性，而且要易于標(biāo)準化。體外替代方法如血清學(xué)試驗和抗原定量試驗在生物安全、動物福利、效率和試驗監(jiān)測等方面具有優(yōu)點。但這兩種方法是對保護性的間接測定，僅能反映部分免疫反應(yīng)的過程。如果抗體滴度或抗原含量與保護性不存在線性或其他曲線關(guān)系，或者保護性受細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)影響，血清學(xué)試驗、抗原含量測定與保護性反應(yīng)就不存在相關(guān)性，這樣的體外替代方法很難完全替代本動物的效力檢驗。替代試驗動物易于規(guī)�；�飼養(yǎng)，均一性易控制。應(yīng)用成本較低的動物進行試驗可通過增加試驗動物的數(shù)量而獲得更加精確的試驗數(shù)據(jù)。替代試驗動物可以模擬疫苗免疫接種后抗原在體內(nèi)通過網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)呈遞的過程、細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)、疫苗佐劑產(chǎn)生的效應(yīng)和靶組織的特異性等體外試驗無法測定的過程。但替代試驗動物模型只可能在某些方面與本動物的免疫反應(yīng)和發(fā)病機理具有相似性，不可能完全復(fù)制本動物的真實情況。替代試驗動物的健康狀況、免疫劑量、攻毒方法等也會對試驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性產(chǎn)生影響。伴隨全世界減少或取消動物試驗的需求，攻毒試驗給發(fā)病動物帶來的痛苦也違反了實驗動物3R原則，就在科學(xué)研究中的應(yīng)用。結(jié)合現(xiàn)階段口蹄疫滅活疫苗效力檢驗替代方法的研究狀況，我們認為在疫苗質(zhì)量控制中，可以在生產(chǎn)階段用抗原含量測定的方法保證疫苗中有效抗原的含量；而在成品疫苗的效力檢驗時嘗試將體外檢測方法與動物體內(nèi)檢測方法相結(jié)合進行綜合評價，大批量的終產(chǎn)品檢驗可以通過體外試驗數(shù)據(jù)來進行檢驗，從而減少試驗的數(shù)量；在終產(chǎn)品的組分發(fā)生改變時用動物進行效力檢驗，以探索一種有較好重復(fù)性、可靠性和易于標(biāo)準化的替代方法。
