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豬瘟為養(yǎng)豬業(yè)中的重要傳染病。根據(jù)OIE制定的《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》2007年版，CSF被列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病之一。加拿大、美國(guó)和歐洲部分國(guó)家通過疫苗免疫、撲殺等綜合防制技術(shù)措施已消滅了CSF。CSF在我國(guó)被列為“一類動(dòng)物疫病”，作為一種計(jì)劃消滅的重大動(dòng)物疫病正受到我國(guó)政府的高度重視，目前我國(guó)對(duì)CSF的控制采取的策略是強(qiáng)制免疫、撲殺及綜合防控措施。因此，不論是CSF基礎(chǔ)領(lǐng)域還是防控策略研究，對(duì)我國(guó)CSF的凈化都十分重要�，F(xiàn)將近十年來研究進(jìn)展以及對(duì)我國(guó)CSF凈化策略的研究綜述如下：
一、我國(guó)豬瘟病毒分子流行病學(xué)及信息系統(tǒng)的研究
CSF分子流行病學(xué)調(diào)查研究對(duì)闡明CSFV的遺傳變異特征和規(guī)律，掌握當(dāng)前的流行現(xiàn)狀，溯源和追蹤每一起CSF發(fā)生的來源和去向，監(jiān)測(cè)現(xiàn)行使用疫苗的有效性，建立分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，提出新的防制策略具有十分重要的科學(xué)意義。
為弄清我國(guó)CSF流行病學(xué)本底，研究我國(guó)CSFV的遺傳變異程度及其遺傳多態(tài)性分布，在國(guó)家重大自然科學(xué)基金的支持下，軍事獸醫(yī)研究所和中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所率先開展了中國(guó)CSFV分子流行病學(xué)研究。從來自全國(guó)所有31個(gè)省市自治區(qū)具有代表性的CSF病料中測(cè)定了501條E2基因序列并進(jìn)行了分析，毒株時(shí)間跨度自1979到2010年間。國(guó)際上將CSFV分為3個(gè)基因群(Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群)，10個(gè)基因亞群(1.1、1.2、1.3、2.1、2.2、2.3、3.1、3.2、3.3和3.4)。分析表明流行毒株均為4個(gè)基因亞群(2.1、2.2、2.3和1.1)，以基因2群(71.66%)為主，其次是1群(28.34%)。2.1、2.2、1.1基因亞群沒有地區(qū)差異，2.3主要分布于我國(guó)廣東、廣西、福建、湖北、湖南等南方地區(qū)，數(shù)量少，不是主要流行毒株。一直沒有監(jiān)測(cè)到基因3群的傳入與流行，但在周邊國(guó)家和地區(qū)如韓國(guó)、泰國(guó)、臺(tái)灣等均有基因3群，應(yīng)嚴(yán)密加強(qiáng)監(jiān)測(cè)。闡明了我國(guó)CSFV遺傳變異情況在32年間處于穩(wěn)定狀態(tài)，流行區(qū)域相對(duì)穩(wěn)定。對(duì)豬瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)有效性進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，多年來一些專家認(rèn)為流行毒株免疫基因正在朝著遠(yuǎn)離疫苗的方向而變異，導(dǎo)致疫苗免疫失敗。對(duì)此，對(duì)上述從1979-2010年的流行毒株與疫苗株核苷酸同源性進(jìn)行逐年分析，發(fā)現(xiàn)疫苗毒株抗原基因與流行株同源性在2007年最低，為76.2%，疫苗免疫保護(hù)試驗(yàn)也證實(shí)了我國(guó)目前使用的疫苗對(duì)同源性在76.2%以上的流行毒株攻擊依然有效。為此在我國(guó)使用HCLV進(jìn)行高密度(100%)強(qiáng)制免疫，仍然是有效的手段。筆者建議在今后的監(jiān)測(cè)工作中，如果發(fā)現(xiàn)流行毒株與疫苗株的E2 基因同源性低于76.2%時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步監(jiān)測(cè)疫苗的有效性。國(guó)際上對(duì)CSFV的分子流行病學(xué)研究，以位于德國(guó)漢諾威(HannoVer)的歐盟CSF參考實(shí)驗(yàn)室研究數(shù)據(jù)最為完善，他們收集的E2基因數(shù)據(jù)已經(jīng)接近1000條，來自于35個(gè)國(guó)家，包括中國(guó)臺(tái)灣49條序列。我國(guó)CSFV分子流行病學(xué)調(diào)查研究，弄清了中國(guó)CSFV的遺傳衍化背景，研究填補(bǔ)了國(guó)際上CSFV分子流行病學(xué)研究缺乏中國(guó)數(shù)據(jù)這一空白，查清了我國(guó)CSF分子流行病學(xué)本底。通過調(diào)用漢諾威的基因數(shù)據(jù)，可查清我國(guó)豬瘟流行毒株的來龍去脈，為防治提供依據(jù)。我國(guó)養(yǎng)豬模式多樣，生態(tài)環(huán)境多樣，繼續(xù)開展不間斷的分子流行病學(xué)跟蹤調(diào)查，實(shí)時(shí)跟蹤病毒變異特征及抗原性變異程度，監(jiān)測(cè)新的流行毒株的情況和疫苗對(duì)流行毒株的有效性，不僅對(duì)我國(guó)CSF防制具有重要的指導(dǎo)意義，對(duì)建立該病毒的全球監(jiān)測(cè)體系具有深遠(yuǎn)意義。
如果不對(duì)這些寶貴的生物材料和數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)分析和整理歸類，將是CSF流行病學(xué)數(shù)據(jù)研究的一大失策。為加強(qiáng)對(duì)CSF流行病學(xué)信息的統(tǒng)一管理，掌握全球CSF數(shù)據(jù)，分析CSF傳播來源，建立一整套連續(xù)、可靠、完整、系統(tǒng)的國(guó)內(nèi)外CSF流行病學(xué)資料，對(duì)我國(guó)CSF防控具有十分重要的意義。中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所聯(lián)合軍事獸醫(yī)研究所、中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心將CSF流行病學(xué)信息數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫技術(shù)、GIS技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)相結(jié)合。采用ArcGIS桌面產(chǎn)品、ArcMapObjects軟件、Delphi和DNAStar 6.0軟件，在中國(guó)數(shù)字地圖的數(shù)據(jù)支持下，創(chuàng)新性的建立了CSF流行病學(xué)信息系統(tǒng)(CSFinfo)，使我們成為全球繼德國(guó)之后第二個(gè)有這種數(shù)據(jù)庫的國(guó)家。通過windows文件關(guān)聯(lián)功能建立了與DNAStar6.0序列分析軟件的關(guān)聯(lián)，實(shí)現(xiàn)了空間數(shù)據(jù)與序列分析的完整結(jié)合，是該系統(tǒng)的一大創(chuàng)新，較德國(guó)數(shù)據(jù)庫更為直觀。CSFinfo的建立對(duì)CSF流行病學(xué)監(jiān)測(cè)提供了必要的技術(shù)支持，提高了對(duì)CSFV流行毒株總體分布、疫情發(fā)生發(fā)展趨勢(shì)的科學(xué)了解和掌握，提供科學(xué)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析手段。為政府和養(yǎng)殖戶CSF防控提供可靠的疫情資料具有十分重要的意義。
二、豬瘟系列診斷新技術(shù)取得突破
近年我國(guó)CSF診斷技術(shù)取得突破性進(jìn)展。病原分子診斷技術(shù)已經(jīng)達(dá)到國(guó)際水平，同時(shí)建立了抗體阻斷ELISA方法和抗體間接ELISA方法。至此，我們?cè)贑SF診斷、疫情監(jiān)測(cè)、分子流行病學(xué)調(diào)查分析等所需的檢測(cè)方法已經(jīng)系統(tǒng)建立，已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)建立和掌握CSF診斷技術(shù)最全的實(shí)驗(yàn)室。
1.病原學(xué)診斷技術(shù)
CSFV通用熒光RT-PCR試劑盒可對(duì)所有CSFV進(jìn)行檢測(cè)，該方法十分成熟和穩(wěn)定，獲國(guó)家專利(200610109404.X，2009.1.14)，已成為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿，特別對(duì)非典型、溫和型及持續(xù)感染CSF的診斷提供一個(gè)快速、敏感、準(zhǔn)確的方法，是適用于種豬凈化的可靠手段。我國(guó)CSF免疫采取的是100%強(qiáng)制免疫措施，建立快速、敏感、特異地檢測(cè)CSFV野毒的方法十分必要，CSFVMGB鑒別熒光RT-PCR方法的研制，為臨床鑒別野毒和疫苗毒提供了可靠的工具，該方法獲國(guó)家專利(CN22010242080.0，2009-12-03)。近年，對(duì)CSFV常規(guī)RT-PCR及RT-nPCR方法的研究報(bào)道較多，不同國(guó)家不同實(shí)驗(yàn)室在不同靶區(qū)建立各自的檢測(cè)方法，但沒有經(jīng)過權(quán)威機(jī)構(gòu)的統(tǒng)一對(duì)比鑒定，我國(guó)至今也沒有建立一套權(quán)威準(zhǔn)確可靠的CSFV RT-PCR檢測(cè)方法。歐盟CSF參考試驗(yàn)室根據(jù)已知毒株的基因序列，鎖定主要保護(hù)性抗原E2基因區(qū)域的2467-2738之間共272bp的片段作為序列測(cè)定和分析目標(biāo)，雖然該擴(kuò)增片段較短，但包含CSFV主要抗原區(qū)域，最能反應(yīng)不同毒株抗原基因序列的變化特點(diǎn)，是用于毒株間系統(tǒng)發(fā)生分析的首選公認(rèn)區(qū)域。我們經(jīng)過長(zhǎng)達(dá)12年臨床應(yīng)用和改進(jìn)，優(yōu)化了該方法，不僅可用于核酸的檢測(cè)和診斷，采用其擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序用于CSFV分子流行病學(xué)研究，達(dá)到了一舉兩得的目的。
CSFV抗體標(biāo)記技術(shù)有免疫熒光技術(shù)和過氧化物酶標(biāo)記技術(shù)，也是OIE推薦的CSF病原檢測(cè)技術(shù)之一。采用從英國(guó)VLA實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的CSFVE2單抗WH303作為一抗，標(biāo)記辣根過氧化酶的兔抗鼠二抗，建立了免疫過氧化物酶細(xì)胞單層試驗(yàn)染色方法，用于CSFVTCID50檢測(cè)、病毒分離鑒定、拯救重組CSFV的鑒定及毒價(jià)測(cè)定，具有很好的特異性和穩(wěn)定性。直接對(duì)單抗WH303進(jìn)行熒光素標(biāo)記，制成熒光特異性抗體，直接與細(xì)胞或組織中相應(yīng)蛋白抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下即可見抗原存在部位呈現(xiàn)特異性熒光。我所和軍事獸醫(yī)研究所采用該單抗(WH303)分別建立了CSFV免疫熒光試驗(yàn)和CSFV間接免疫熒光試驗(yàn)，較多抗標(biāo)記法更特異和準(zhǔn)確，容易分辨，錯(cuò)判誤判率會(huì)大大減少，田間推廣應(yīng)用容易，是CSF凈化的一項(xiàng)準(zhǔn)確、特異和簡(jiǎn)便的技術(shù)。
