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5 保溫孵育
5.1 在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加酶結(jié)合物和加底物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，保溫過程按照說明書要求，一般為常溫(20~25℃)溫育，可根據(jù)室溫適當調(diào)節(jié)保溫時間。
5.2 在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應(yīng)適當鋪墊紙巾或其他材料。
5.3 孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后再添加樣品，有利于檢測結(jié)果的準確性。
6 洗板
6.1 ELISA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)�？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴格按要求洗滌，不得馬虎。
6.2 洗板時尤其是將孔內(nèi)液體甩干時，動作要快、要干凈利落，要把整板垂直倒置，將液體甩出，防止各孔液體混流，最后在吸水紙上拍干，不可甩干。此種方法可有效避免試劑盒孔的交叉污染。
6.3 洗板次數(shù)和兩次洗板間隔時間應(yīng)盡量按照說明書進行。
7 顯色
7.1 顯色是ELISA中的最后一步溫育反應(yīng)，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。
7.2 在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。
7.3 定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷。
8 測定
8.1 對定量判定應(yīng)繪制半對數(shù)曲線，從曲線上讀出樣品對應(yīng)濃度值。本實驗室酶標儀通過吸光度可直接得出濃度值，再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)即為樣品中克倫特羅的實際濃度值。
8.2 對于每次實驗濃度值的準確性判定可觀察標準樣品的吸光度值是否為線性關(guān)系，即吸光度值是否呈梯度遞減。當吸光度值無明顯梯度時應(yīng)考慮重新檢測。因為標準檢測不準確，機器依照標準檢出的數(shù)據(jù)也會不準確。
8.3 當板間差異性大時，可能原因是板與板之間孵育時間相差太大，板與板之間洗滌不一致，移液槍使用不當，溫度不同等。
只要操作者嚴格按照步驟進行，并且每項操作都認真、仔細，尤其注重細節(jié)的操作，克倫特羅ELISA快速檢測試劑盒的準確性也相對較高，較適合實驗室大批樣品的檢測需要。
